鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

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1、鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)　　摘要為分離和鑒定疑似鏈球菌感染病料，該試驗(yàn)采用革蘭氏陽性菌選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，并進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定及藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明：6份病料中分離出6株鏈球菌菌株，根據(jù)生化試驗(yàn)鑒定表推斷出，有4株為C群，1株為D群，1株為E群。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，先鋒必和青霉素對鏈球菌有較好的抑制作用，此結(jié)果為鏈球菌病的研究和防治提供一定的理論依據(jù)?！　￡P(guān)鍵詞鏈球菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)　　中圖分類號S852.61文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號1007-5739（2013）04-0270-02　　鏈球菌（Streptococcus）廣泛存在于自然界，水

2、、塵埃、動(dòng)物體表、消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，大多數(shù)不致病。醫(yī)學(xué)上重要的鏈球菌主要有化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌、羊鏈球菌等，有些可致人和動(dòng)物各種化膿性疾病、肺炎、乳腺炎、敗血癥等。近段時(shí)間，楚雄州部分羊場發(fā)生羊急性死亡病例，該試驗(yàn)通過對部分羊場送檢的7份病料進(jìn)行分離鑒定與藥敏試驗(yàn)，了解各地羊發(fā)病的原因，從而為該病的預(yù)防和用藥提供一定的理論基礎(chǔ)。　　1材料與方法　　1.1試驗(yàn)材料　　1.1.1病料來源。各地送檢的疑似鏈球菌病引起的病變組織，共7份，保存于4℃冰箱。　　1.1.2試驗(yàn)試劑。牛心浸液、兔子全血、牛肉浸膏、

3、瓊脂粉、血清、蛋白胨、磷酸二氫鈉、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蒸餾水、乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、磷酸氫二鉀、酵母金粉、胰胨、L-精氨酸鹽鹽酸、檸檬酸鐵、0.5%酸性復(fù)紅、精氨酸、馬尿酸鈉、七葉苷、淀粉酶、甘露醇、乳糖、棉子糖、山梨醇、菊糖、水楊苷、海藻糖、伯膠糖等，均來自于傳染病實(shí)驗(yàn)室?！　?.1.3培養(yǎng)基。疊氮鈉血瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、牛心浸液培養(yǎng)基、馬丁肉湯培養(yǎng)基、6.5%NaCl生長培養(yǎng)基、血清糖發(fā)酵培養(yǎng)基、精氨酸培養(yǎng)基、3-羥基丁酮培養(yǎng)基、馬尿酸鹽培養(yǎng)基、七葉苷培養(yǎng)基、葡萄糖培養(yǎng)基、蔗糖培養(yǎng)基、海藻糖培養(yǎng)基等培養(yǎng)基均按照陳天壽《微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)

4、用》[1]中的方法配制?！　?.1.4藥敏片。青霉素、紅霉素、萬古霉素、卡那霉素、氟哌酸、先鋒必、復(fù)方新諾明。　　1.2試驗(yàn)方法　　1.2.1病原分離培養(yǎng)。將病料從橫斷面剪開，露出新鮮的組織液，在疊氮鈉血液培養(yǎng)基上涂抹一點(diǎn)后，做常規(guī)劃線分離。37℃培養(yǎng)24～48h，挑取可疑菌落做純培養(yǎng)后，進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定。　　1.2.2鏡檢。先于載玻片上滴1滴蒸餾水，用鉑耳挑取待檢的菌落于載玻片上涂片，酒精燈火焰固定，革蘭氏染色，鏡檢?！　?.2.3純培養(yǎng)。選擇疊氮鈉血瓊脂培養(yǎng)基上有溶血的可疑菌落接種于血清葡萄糖瓊脂斜面或馬丁肉湯瓊脂斜面，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)

5、24～48h，作為菌種。　　1.2.4生化試驗(yàn)。從血清葡萄糖瓊脂斜面或馬丁肉湯瓊脂斜面，挑取待檢菌落或菌苔接種于各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基和生化培養(yǎng)中，于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h，觀察培養(yǎng)基變化和做生化試驗(yàn)。　　1.2.5藥敏試驗(yàn)。將純培養(yǎng)菌株接種于馬丁肉湯中，37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。然后將菌液稀釋至麥?zhǔn)媳葷峁艿?管的濃度（即0.5管），用滅菌移液器吸取0.1mL接種到馬丁肉湯瓊脂培養(yǎng)基中，用“L”型玻璃刮子均勻涂布，置室溫或4℃下吸收液體。在無菌條件下將抗菌素藥敏紙片貼于培養(yǎng)基中，紙片之間的距離為2cm，紙片與平皿壁的距離為2cm，于4℃

6、下擴(kuò)散1h，移入37℃培養(yǎng)24～48h，觀察并測量抑菌圈的大小?！　?結(jié)果與分析　　2.1分離培養(yǎng)結(jié)果　　該試驗(yàn)研究致病性鏈球菌，在血瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)β溶血，在菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細(xì)胞完全溶解[2]。病料接種培養(yǎng)24～48h，可見圓形、露滴狀、邊緣呈β溶血的菌落與鏈球菌培養(yǎng)特性相符合。疊氮鈉血瓊脂培養(yǎng)基的溶血情況見圖1?！　?.2鏡檢結(jié)果　　鏈球菌呈球形或卵圓形，直徑小于2.0μm，常排列成鏈狀或成雙。革蘭氏染色呈藍(lán)紫色[2]，鏈球菌的染色鏡檢情況見圖2?！　?.3生化試驗(yàn)結(jié)果　　分離菌株經(jīng)過生化試驗(yàn)，送檢實(shí)驗(yàn)室的7份病料中，6個(gè)菌

7、株為鏈球菌，1株為葡萄球菌。6株鏈球菌均能水解精氨酸和淀粉酶。分離株羊1、羊2、羊4能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖，在6.5%NaCl培養(yǎng)基上不能生長，不能水解馬尿酸鈉、七葉苷、露醇羊、山梨醇、半乳糖、3-羥基丁酮（VP）、菊糖、棉實(shí)糖、海藻糖、伯膠糖、水楊苷，與馬鏈球菌亞種生化特性相符合[3-4]；分離株羊3能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、菊糖、半乳糖、棉實(shí)糖、海藻糖和伯膠糖，能水解七葉苷，在6.5%NaCl培養(yǎng)基上不能生長，不能水解馬尿酸鈉、甘露醇、山梨醇、水楊苷、3-羥基丁酮（VP），與羊鏈球菌生化特性相符；羊5不能發(fā)酵菊糖，能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、

8、棉實(shí)糖、海藻糖和伯膠糖，能水解七葉苷、甘露醇和水楊苷，能在6.5%NaCl培養(yǎng)基上生長，不能水解馬尿酸鈉、山梨醇和3-羥基丁酮（VP），與乳房鏈球菌生