溪黃草多糖含量測定與活性研究

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1、溪黃草多糖含量測定與活性研究【摘要】目的研究溪黃草多糖含量及其對羥自由基的清除作用和抑菌作用。方法從溪黃草中提取精制多糖，測定出溪黃草多糖對葡萄糖的換算因子，用蒽酮硫酸法比色測定計(jì)算多糖的含量；采用Fenton反應(yīng)體系為模型，研究多糖對羥自由基的抑制作用；采用濾紙片法研究多糖的體外抑菌作用。結(jié)果溪黃草多糖含量為4.18%，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率較好；活性測試結(jié)果表明溪黃草多糖對羥自由基有較好的清除作用，對金黃色葡萄球菌和枯草桿菌有一定的抑菌效果。結(jié)論溪黃草多糖含量測定方法簡單可行，具有一定清除自由基和抑菌活性

2、?！娟P(guān)鍵詞】溪黃草；多糖；含量測定；羥自由基；抑菌作用　　Abstract：ObjectiveTostudythecontentofpolysaccharidefromRabdosiaserra(Maxim.)Haraanditseffectonhydroxylfreeradicalandantibacteriostaticeffect.MethodsPolysaccharideRabdosiaserra(Maxim.)Hara,anditscontenteasuredbyasamodel.Itsantib

3、acteriostaticeffect.)Harareached4.18%.Ithadinhibitoryeffectonhydroxylfreeradical，staphylococcusaureusandB.subtili.ConclusionThemethodofmeasuringpolysaccharidecontentissimpleandreliable.Thepolysaccharidehassomeactivities.　　Key.)Hara；Polysaccharide；Contentdete

4、rmination;Hydroxylfreeradical；Antibacteriostaticeffect溪黃草Rabdosiaserra(Maxim.)Hara為唇形科香茶菜屬植物，是一種多年生小草本。具有清熱袪濕、涼血散淤之功效，民間用于治療急性肝炎、急性膽囊炎、跌打淤腫等癥［1］。多糖是一類免疫活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老等作用［2～5］。目前對溪黃草多糖的研究未見報(bào)道。本文建立石油醚去脂80%乙醇去雜熱水提取氯仿、正丁醇去蛋白質(zhì)活性炭去色素乙醇沉淀的提取工藝

5、，從溪黃草中提取多糖，測得溪黃草多糖對葡萄糖的換算因子，用蒽酮硫酸比色法測定并計(jì)算出溪黃草多糖含量，根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件研究了其對羥自由基的清除作用和體外抑菌作用，期望為肇慶山區(qū)中藥材的綜合開發(fā)利用提供一些參考?！　?器材　　1.1儀器DJ10A傾倒式粉碎機(jī)、A2004N和FA2004N電子天平、RE52AA旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器、HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋、低溫冰柜、脂肪抽出裝置、電熱恒溫真空干燥箱、752分光光度計(jì)、UVProbe2550型紫外可見光光度計(jì)、電熱手提壓力蒸氣消毒器、水式熱恒溫培養(yǎng)箱?！　?.2材料溪黃草

6、購于肇慶中藥材市場；大腸桿菌（Escherichiacoil）、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、金黃色葡萄球菌（Stapphylocacusaureus）、黑曲霉（Aspergillusniger）、酵母菌(Yeastfungus)均由肇慶學(xué)院生物學(xué)系微生物室提供。（細(xì)菌于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上活化（37℃，24h）；霉菌于查氏培養(yǎng)基上活化（28℃，48h）；酵母菌于無菌水中活化（28℃，4h）?！　?.3試劑蒽酮、濃硫酸、硫脲、水楊酸、過氧化氫、硫酸亞鐵、無水乙醇、丙醇、石油醚、乙醚、氯仿、正

7、丁醇等為國產(chǎn)分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1溪黃草多糖的提取與精制稱取溪黃草粉末60g，置脂肪抽出裝置中，加入石油醚（60～90℃）250ml，回流脫脂。濾渣揮干溶劑后，加入80%乙醇回流提取2次（1.5h/次）。將濾渣揮干溶劑后加蒸餾水400ml，回流提取1h。取濾液，濾渣再加蒸餾水300ml提1次，將兩次所得濾液合并，減壓濃縮至一定體積。加入氯仿正丁醇液（4∶1）輕搖，靜置取多次，除去蛋白質(zhì)。水溶液中加入適量活性碳60℃保溫30min，過濾，濾液冷卻后加入乙醇，使乙醇濃度達(dá)85%，放置4℃冰箱中過夜。抽

8、濾，沉淀依次用95%乙醇、丙醇、乙醚各洗3次，真空干燥至恒重，即得精制溪黃草多糖，密封保存?zhèn)溆??！　?.2樣品中溪黃草多糖含量測定　　2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.2000g，置100ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度；搖勻，制成2.000mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后分別移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。置于10ml容量瓶中