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《無血清體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、無血清體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞的研究作者：張懷東，宋振嵐,李偉平【摘要】本研究的目的是建立對(duì)外周血來源的樹突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)的無血清培養(yǎng)方案。以含胎牛血清(FCS)、人AB血清的培養(yǎng)液作為對(duì)照。分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMNC），在不同培養(yǎng)液中分別加入GM-CSF（100ng/ml）、IL-4（500U/ml）培養(yǎng)6天，再分別加入鈣離子載體A23187（100ng/ml）繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表型，MTT比色法檢測(cè)各組DC刺激同種異體外周血T細(xì)胞增殖的能力和DC刺激的T細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)果表明：無血清培
2、養(yǎng)組培養(yǎng)出典型形態(tài)的DC，其表面CD14分子的表達(dá)明顯減少，CD83、HLA-DR、CD-freeMedium AbstractThisstudyedtoinvestigatetheprotocolinvitrotoincubatethedendriticcell(DC)derivedfromperipheralbloodmonocytesusingserum-freemediumX-VIVO20.PeripheralbloodmonocytesfromhealthydonorslGM-CSFand500U/mlIL-4,respectively.Aftercultivationfo
3、r6days,theylcalciumionophoreA23187.Aftercultivationfor24hoursthecellularmorphologyicroscope,thesurfacemarkersetry,theproliferationofallogeicTcellsetry,thespecificcytotoxicityofTcellsprimedinedbyMTTassay.Theresultssho-free,fetalcalfserum(FCS)andhumanABserummediums,cellsdisplayedcharacteristicmorph
4、ologicalfeaturesofDC.SimultaneouslyCD14expressionethodscouldevidentlystimulatetheproliferationofallogeicTcell.Asparedcontaininggroups,theculturedcellsintheserum-freegroupsshoostthesameallo-stimulatorycapabilityandcellularmorphologyandsurfacemarkers,andTlymphocytesprimedilarkillingactivitytoK562(P
5、>0.05).ItisconcludedthatthereisnosignificanceinDCnumbers,morphology,epitopeandabilitytostimulatetheproliferationofallogeicTcellsbet-freeX-VIVO20mediumandDCinducedbyserum-containedmedium.DCculturedandinducedbyserum-freemediumis-freemedium;calciumionophore;peripheralblood 樹突狀細(xì)胞是StEinman和Cohn于19
6、73年首先報(bào)道的,因其成熟時(shí)有樹突樣或偽足樣突起而得名［1］。它源于造血干細(xì)胞,廣泛分布于淋巴組織和非淋巴組織中,是機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presentingcells,APC)［2］，其最大的特點(diǎn)是能夠顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖,是機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者。目前，多數(shù)體外培養(yǎng)液包含胎牛血清、混合人(AB型)血清或自體血清,由于血清中包含個(gè)體差異性的生長(zhǎng)因子,異體血清又有外來抗原及危險(xiǎn)感染侵入的弊端,人自體血清中又含有某些抑制DC生長(zhǎng)的因子，這將使DC的臨床應(yīng)用受到限制。本實(shí)驗(yàn)采用無血清培養(yǎng)液X-VIVO20則避免了上述缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過比較X-VIVO20與含F(xiàn)CS、人
7、AB血清的培養(yǎng)基對(duì)體外誘導(dǎo)擴(kuò)增DC的影響，為進(jìn) 一步優(yōu)化無血清培養(yǎng)液條件，使DC療法應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法 材料 淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll，密度1.077）購于上海華精生物高科技有限公司，rhGM-CSF購于華北制藥集團(tuán)金坦生物技術(shù)開發(fā)有限公司，rhIL-4、人血白蛋白、四甲基偶氮唑鹽（MMT）、鈣離子載體A23187均為Sigma公司產(chǎn)品，人AB血清（大連市中心血站產(chǎn)品），胎牛血清（民海生物工程有限公司產(chǎn)
