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1、應(yīng)用自制組織芯片研究抑癌基因PTEN在口腔鱗癌中的表達(dá)作者：龔莉,周鐵軍,陳鮮,陳偉妍,陳宣世【摘要】目的從蛋白水平探討口腔鱗癌組織中腫瘤抑制基因PTEN的表達(dá)及臨床病理意義。方法應(yīng)用SP免疫組化染色法和組織芯片技術(shù)，檢測10例正?？谇徽衬?、10例口腔上皮單純增生、15例口腔粘膜白斑及72例OSCC（其中高分化30例、中分化26例、低分化16例）組織中PTEN蛋白的表達(dá)，同時(shí)分析PTEN的表達(dá)與患者臨床病理資料的關(guān)系。結(jié)果PTEN基因在口腔鱗癌、口腔粘膜白斑、口腔上皮單純增生和正?？谇徽衬そM織中的
2、陽性率分別為72.2％（52/72）、93.3％(14/15)、100％(10/10)和100％(10/10)，口腔鱗癌組與其他各組間有顯著性差異（P<0.05）；PTEN的陽性表達(dá)率在不同性別、年齡和TNM分期等臨床病理參數(shù)間無顯著性差異（P>0.05），但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度等臨床病理參數(shù)間有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論P(yáng)TEN基因表達(dá)的下調(diào)在OSCC的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，其表達(dá)的異?？勺鳛榕袛囝A(yù)后的參考指標(biāo)之一?！娟P(guān)鍵詞】PTEN；口腔鱗癌；組織芯片；免疫組
3、化 ExpressionofTumorSuppressorGenePTENinOralSquamousCellCancerUsingTissueMicroarrayTechniques Abstract：ObjectiveToexploreexpressionofPTENinoralsquamouscellcarcinoma(OSCC)anditsclinicopathologicalsignificance.MethodsPTENprotEinexpressioninparaffinembe
4、ddedtissuesfrom10casesofnormaloralmucosa,10casesoforalepithelialhyperplasia,15casesoforalleukoplakiaand72casesofOSCCmunohistochemicalmethodandtissuemicroarraytechniques,meanaloralmucosa，thereongthem（P<0.05）.PTENexpressionetastasesanddegreeofOSCC（P&
5、lt;0.05）.ConclusionLossofPTENproteinexpressionmayplayanimportantroleonthetumorigenesisanddevelopmentofOSCC,PTENcanbeusedasareferencemarkerforjudgingprognosisofpatientsicroarraytechniques;Immunohistochemicalmethod 0引言口腔鱗癌(Oralsquamouscellcarcinoma,OSC
6、C)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生的機(jī)制尚不清楚。癌基因和抑癌基因的突變及表達(dá)異常在腫瘤的形成過程中起著重要的作用。新近發(fā)現(xiàn)的抑癌基因PTEN是第一個(gè)具有磷酸酶活性的腫瘤抑制基因，與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系，其表達(dá)下調(diào)促進(jìn)腫瘤發(fā)展，但PTEN與OSCC的關(guān)系尚未見報(bào)道。我們采用組織芯片和免疫組化技術(shù)檢測PTEN在OSCC中的表達(dá)情況，探討PTEN在OSCC發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用?！ ?材料與方法 1.1研究對象收集瀘州醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室1999～2004年72例口腔鱗癌手術(shù)存檔
7、石蠟標(biāo)本，并隨機(jī)選取10例正?？谇徽衬?、10例口腔上皮單純增生及15例口腔粘膜白斑的石蠟標(biāo)本。所有病例均為首次發(fā)病，術(shù)前均未接受放療、化療?；颊吣?9例，女23例；年齡在22～86歲之間，中位年齡58歲。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。所有標(biāo)本均經(jīng)10％中性甲醛固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片?！ ?.2試劑與方法 1.2.1組織芯片的制備 采用手工制作芯片。（1）定位：由兩位高年資病理醫(yī)師進(jìn)行篩選，找出腫瘤組織中具有代表性的區(qū)域，并在相應(yīng)的石蠟塊上做出標(biāo)記。（2）微陣列蠟塊的制作
8、：先制作空白受體蠟塊。采用包埋框方法制出直徑為1.8mm，間距為2mm，橫向編號為1～7，縱向?yàn)锳～F，共42個(gè)小孔的空白受體蠟塊。然后用一內(nèi)徑為1.7mm空針頭依次在上述標(biāo)記好的蠟塊上鉆取組織，依次放入空白受體蠟塊中。將構(gòu)建好的陣列蠟塊放入模具中，再放入二次包埋儀中進(jìn)行二次包埋制出微陣列蠟塊。（3）切片，裱片：將制作好的組織微陣列蠟塊重新切片，厚度為4μm。將切片裱于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，制成組織芯片。共制作微陣列3個(gè)包含123個(gè)組織樣本，有16個(gè)重復(fù)標(biāo)本?！ ?.2.2免
