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《克拉霉素抑制血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、克拉霉素抑制血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)摘要:目的研究克拉霉素對(duì)血管生成的影響并在此基礎(chǔ)上觀察其抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法采用b-FGF誘導(dǎo)小鼠腹壁Matrigel種植體方法進(jìn)行血管生成實(shí)驗(yàn)，比較克拉霉素處理組和對(duì)照組Matrigel種植體內(nèi)血紅蛋白含量和微血管面積的差異.采用Leg・kg-1・d-1時(shí)，Matrigel種植體中血紅蛋白含量和微血管面積開始明顯減少，并具有劑量-效應(yīng)關(guān)系.克拉霉素能夠明顯降低腫瘤組織內(nèi)的微血管密度［（27±10）vs（14±7），P=0.042］，肺臟轉(zhuǎn)移瘤數(shù)量［（10±5）vs（17±9），P=0.039］并明顯
2、延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間［（27±10）dvs（19±8）d，P=0.022］.結(jié)論克拉霉素對(duì)b-FGF誘導(dǎo)和腫瘤組織內(nèi)的血管生成均具有明顯抑制作用，能夠有效減少荷瘤小鼠的腫瘤轉(zhuǎn)移并延長(zhǎng)存活時(shí)間，在腫瘤的綜合治療中具有一定的應(yīng)用價(jià)值. Keyycin;angiogenesis;carcinoma，leycinonangiogenesisandtumormetastasisinmice.METHODSUsingquantitativeanalysistoparehemoglobinandmicrovascularareasinMatrigelimplantbe-ticrovesseldensi
3、tyintumor，occurrenceoflungmetastasis，tumorvolumeandmeansurvivaltimeor-bearingC57BL/6mice.RESULTSQuantitativeanalysisofhemoglobinandmicrovascularareasinMatrigelimplantindicatedthatclarithromycincaninhibitangiogenesisathighconcentration.Clarithromycineffectivelyreducedthequantitationofmicrovesseldens
4、ityintumor，thenumberoftumornoduleinthelungandincreasedthemeansurvivaltimeoftumor-bearingmice.CONCLUSIONClar-ithromycinhasinhibitoryeffectonangiogenesisandtumormetastasisandmighthavetherapeuticvalueintumortreat-ment. 0引言 血管生成（angiogenesis）在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用，抗血管生成是目前腫瘤治療的熱點(diǎn)課題［1，2］.克拉霉素（clarithromyc
5、in，CAM）是臨床上常用的新型14環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，近年來(lái)有關(guān)此類抗生素具有生物反應(yīng)調(diào)節(jié)作用的研究引人注目［3-5］，由于CAM參與調(diào)控的細(xì)胞因子中許多與血管生成密切相關(guān)，因此CAM可能具有潛在的抗血管生成作用.鑒于此，我們采用Matrigel種植體的方法，觀察CAM對(duì)b-FGF誘導(dǎo)小鼠腹壁血管生成的影響，并在此基礎(chǔ)上觀察其對(duì)Lea），血紅蛋白測(cè)定試劑（Sigma），CD31抗體（SantaCruz），S-P組化試劑盒（北京中山生物公司）. 1.2方法 1.2.1Matrigel種植與分組［6］用含牛血清白蛋白的PBS液分別稀釋b-FGF、肝素至實(shí)驗(yàn)濃度，取b-FGF50μL（100
6、ng）、肝素50μL（50U）與冰浴中的Matrigel500μL混勻，小鼠麻醉后腹部正中區(qū)域皮下注射.CAM抑制實(shí)驗(yàn)于Matrigel種植前3d開始，按10～70mg・kg-1・d-1的劑量梯度分為7個(gè)劑量組，每組5只，經(jīng)胃管給實(shí)驗(yàn)小鼠灌注，1次・d-1，連續(xù)8d，對(duì)照小鼠以等體積50g・L-1葡萄糖代替CAM，灌注方法和時(shí)間同實(shí)驗(yàn)組. 1.2.2血紅蛋白含量測(cè)定Matrigel種植5d后斷頸處死小鼠，手術(shù)切開腹部皮膚，取出Matrigel種植體，生理鹽水中清洗2～3次.將Matrigel種植體置于干冰上干燥12h稱重，懸浮于0.5
7、mL0.01g・L-1Triton-100中1～2h并用吸管吹成懸液，15000g離心15min，用分光光度計(jì)測(cè)量上清中的血紅蛋白A405nm值. 1.2.3微血管面積的測(cè)定Matrigel種植體經(jīng)常規(guī)固定，石蠟包埋，制成5μm切片，常規(guī)脫蠟，逐漸水化，先經(jīng)30mL・L-1H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，0.01mol・L-1枸緣酸緩沖液行抗原修復(fù)，再依次加入30mL
