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《平癇沖劑對ｐｔｚ致癇大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng) ｎｍｄａｒ》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、平癇沖劑對ＰＴＺ致癇大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)ＮＭＤＡＲ【摘要】目的：探討平癇沖劑抗癲癇的機(jī)制。方法：腹腔注射戊四唑制成慢性癲癇模型，通過免疫組織化學(xué)方法和顯微圖像分析技術(shù)檢測大鼠顳葉及海馬齒狀回的谷氨酸受體（ＮＭＤＡＲ１）和γ－氨基丁酸受體（ＧＡＢＡＡＲα１）免疫反應(yīng)的陽性細(xì)胞數(shù)（ｎ）、陽性細(xì)胞面積比（Ａａ％）及陽性細(xì)胞積分吸光度（ＩＡ）。結(jié)果：（１）與正常對照組比較，模型組顳葉及齒狀回ＮＭＤＡＲ１的陽性細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞面積比上升，陽性細(xì)胞積分吸光度增加（Ｐ＜０．０１）；而西藥治療組及中藥小、中、大劑量組與模型組比較，顳葉及齒狀回
2、的ＮＭＤＡＲ１陽性細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞面積比都有不同程度地下降，陽性細(xì)胞積分吸光度也有不同程度地減少（Ｐ＜０．０１）。（２）與正常對照組比較，模型組顳葉及齒狀回ＧＡＢＡＡＲα１陽性細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞面積比下降，陽性細(xì)胞積分吸光度降低（Ｐ＜０．０１）；而西藥治療組和中藥小、中、大劑量組與模型組比較，顳葉及齒狀回的ＧＡＢＡＡＲα１陽性細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞面積比都有不同程度地增加，陽性細(xì)胞積分吸光度也有不同程度地升高（Ｐ＜０．０１）。結(jié)論：平癇沖劑抗癲癇的作用機(jī)制可能是通過抑制顳葉及齒狀回興奮性神經(jīng)遞質(zhì)受體ＮＭＤＡＲ１的活性與表達(dá)，并激活
3、其抑制性神經(jīng)遞質(zhì)受體ＧＡＢＡＡＲα１的活性與表達(dá)，從而降低大腦皮質(zhì)的興奮性，有效抑制癲癇的形成及發(fā)展?！娟P(guān)鍵詞】癲癇平癇沖劑ＰＴＺ點(diǎn)燃型癲癇大鼠模型ＮＭＤＡＲ１ＧＡＢＡＡＲα１癲癇是一種常見的慢性腦部疾病，全世界約有４千萬人受累。我國癲癇的患病率約為３．３‰～５．８‰，其中兒童癲癇的發(fā)病率約為成人的１０倍，且半數(shù)以上在１０歲以內(nèi)起?。郏保?。該病嚴(yán)重影響患者的生活、工作、學(xué)習(xí)，且可能在發(fā)作時遭遇危險而危及生命，還會伴有一系列復(fù)雜的社會心理問題，給患者、家庭及社會帶來很大負(fù)擔(dān)［２］。因此如何正確、有效地防治癲癇已成為醫(yī)學(xué)界尤其
4、是兒科界廣泛關(guān)注的問題。平癇沖劑為恩師張士卿教授依據(jù)中醫(yī)理論，憑借多年臨床經(jīng)驗總結(jié)所得，并經(jīng)長期的臨床運(yùn)用，證明確有療效。本實(shí)驗通過檢測大鼠顳葉氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)受體的含量，來探討平癇沖劑對癲癇的治療效果及作用機(jī)理，為臨床治療提供更科學(xué)、更確切的理論依據(jù)。１實(shí)驗材料戊四唑（ＰＴＺ），用前以生理鹽水配制成質(zhì)量濃度為２．５ｍｇ／ｍＬ的溶液；平癇沖劑（膽南星、僵蠶、天麻、代赭石、石菖蒲、丹參、白芍等），用時煎煮濃縮；苯巴比妥，質(zhì)量濃度為１．０３ｍｇ／ｍＬ。２實(shí)驗方法２．１動物分組將６０只２８ｄ齡的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，質(zhì)量（７０±１０
5、）ｇ，雌雄各半（甘肅省實(shí)驗動物研究中心提供，醫(yī)動字第１４－００７號），適應(yīng)性飼養(yǎng)４ｄ后，隨機(jī)分為６組，分別為：正常對照組、模型組、西藥治療組、中藥小劑量組、中藥中劑量組、中藥大劑量組。２．２模型制備除正常對照組外，其余５組均造模，方法參考徐國龍等［３］癲癇模型的制備，即用ＰＴＺ亞驚厥劑量３２ｍｇ／ｋｇ，用前以生理鹽水配制成質(zhì)量濃度為２．５ｍｇ／ｍＬ的溶液，腹腔注射，每日１次，持續(xù)４周后停藥１周，再用相同劑量的ＰＴＺ測試。凡顯示連續(xù)５次Ⅱ級以上驚厥的，則視為達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)，Ⅳ~Ⅵ級的癇性行為被視為充分點(diǎn)燃。大鼠驚厥發(fā)作采用７點(diǎn)
6、評分法［３］。０級：沒有行為上的發(fā)作；Ⅰ級：節(jié)律性點(diǎn)頭或頭部顫搐；Ⅱ級：陣攣性咀嚼；Ⅲ級：頭部顫搐加前肢陣攣性抽搐；Ⅳ級：袋鼠姿勢（上身直立）；Ⅴ級：跌倒；Ⅵ級：全身強(qiáng)直陣攣性驚厥。另外，正常對照組給予相同劑量的生理鹽水。２．３給藥方法造模成功１ｄ后，除正常對照組和模型組外，其余各組開始灌服藥物。平癇沖劑用時煎煮濃縮，灌胃劑量按人與大鼠體表面積比［４］，折算成大鼠等效劑量，每日按４ｍＬ灌服平癇沖劑水溶液，質(zhì)量濃度分別為低劑量組１．４ｇ／ｍＬ、中劑量組３．３ｇ／ｍＬ、高劑量組６．７ｇ／ｍＬ，西藥治療組每日按４ｍＬ灌服質(zhì)量濃度
7、為１．０３ｍｇ／ｍＬ的苯巴比妥，正常對照組和模型組灌服等體積的生理鹽水。每日灌胃１次，連續(xù)灌胃３周。２．４灌注與取材６組大鼠在相同條件下用乙醚吸入麻醉，四肢固定在手術(shù)板上，開胸，暴露心臟，直視下將穿刺針經(jīng)左心室刺入，并以止血鉗固定，然后剪開右心耳，隨即用４℃預(yù)冷的生理鹽水２５０ｍＬ快速灌注，再灌注含４０ｇ／Ｌ多聚甲醛的０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸鹽緩沖液５００ｍＬ。先灌注再改為滴注，調(diào)節(jié)滴速，先快后慢，共滴注１ｈ。觀察大鼠全身僵硬后，迅速開顱取出完整大腦，去除腦干及小腦部分，將修整后的腦組織塊置于上述滴注液內(nèi)，４℃過夜，再置于２０
8、０ｇ／Ｌ蔗糖中１２ｈ。然后每個大腦半球于背側(cè)海馬最大斷面處切?。常恚砗竦慕M織，要求該組織必須含有大鼠顳葉組織。隨后制成石蠟包塊，再做冠狀切片，厚度為４μｍ。２．５免疫組化染色（ＳＡＢＣ法）石蠟切片常規(guī)脫蠟，室溫下放入Ｈ２Ｏ２稀釋液中１０ｍｉｎ后，滴加復(fù)合消化液８ｍｉｎ，再滴加５％ＢＳＡ封閉液２０ｍｉｎ，
