缺氧缺血性腦損傷新生大鼠腦組織水通道蛋白9實(shí)驗(yàn)研

《缺氧缺血性腦損傷新生大鼠腦組織水通道蛋白9實(shí)驗(yàn)研》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、缺氧缺血性腦損傷新生大鼠腦組織水通道蛋白9實(shí)驗(yàn)研【摘要】目的研究缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后水通道蛋白9(AQP9)在腦組織中的表達(dá)變化規(guī)律,初步探討AQP9與腦水腫的關(guān)系。方法采用HIBD動(dòng)物模型,實(shí)施定量PCR(基因水平)和ethodsHIBDanimalmodelinethechangesofAQP9expressionandAQP9mRNA.ResultsAQP9expressionhadnoobviouschangeinthecontrolgroup，butintheHIBDgroup,AQP9expressionincreasedeofi

2、schemia,anditreacheditshighestlevelonthesecondandthirddayofischemia.ConclusionsInhypoxicischemicbraindamage,AQP9expressionincreaseseofhypoxiaandischemia,anditreachesitshighestlevelat72hours.　　【Keyage/pathology;Cerebralischemia;Cerebralhypoxia;Cerebraledema;AQP9;Rats;Animal，expe

3、riment　　缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后,大腦組織將發(fā)生一系列的病理生理變化。其中能量代謝變化和水電解質(zhì)平衡的紊亂始終貫穿于HIBD。研究表明,水通道蛋白9(aquaporin9,AQP9)與大腦的能量代謝和水電解質(zhì)平衡密切相關(guān)[1]。因此研究HIBD后AQP9的表達(dá),探索其在HIBD不同時(shí)間段的變化規(guī)律,有望能為進(jìn)一步闡明HIBD后腦水腫的病理生理機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為臨床治療提供新思路。本文通過對(duì)新生鼠HIBD模型AQP9與腦水腫關(guān)系的研究旨在為今后治療腦水腫開辟新的途徑?！　?材料和方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物200906/08取健康7日齡SD

4、新生大鼠共40只，體質(zhì)量在12～18g,雌雄不限,由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院動(dòng)物中心提供(動(dòng)物合格證號(hào)：黑動(dòng)字DT00102008)。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和HIBD模型組各20只。所有動(dòng)物均按照國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用指南,動(dòng)物飼養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室,室溫穩(wěn)定在20℃,12h明暗交替?！　?.2標(biāo)本取材實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備外科手術(shù)器械一套，操作臺(tái)，綁鼠板，無影燈，臺(tái)燈(60emPER(89826)。MMLV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒:PromegaCat#A3500(100個(gè)反應(yīng))?！　QP9引物上游序列:5′TTGGACCATCATAGGCGC3′,下游序列:5′GCA

5、TGTGATCGACATTGACC3′,擴(kuò)增片段長(zhǎng)698bp,TRIZOLReagent(美國(guó)Invitrogen公司)，0.2mLPCR管,0.5、1.5mL離心管,10、200、1000μL吸頭(美國(guó)Axygen公司)3mL勻漿器，氯仿(三氯甲烷)，異丙醇,75%無水乙醇(DEPC水配制)?！　『怂岬鞍讬z測(cè)儀(德國(guó)Eppendorf公司)，HimacCF16RX低溫冷凍高速離心機(jī)(日本HITACHI公司)，Gilson和Dragon微量加樣槍0.2～1000μL,熒光定量PCR儀LightCycler2.0(德國(guó)Roche公司)，超純水系統(tǒng)(Sa

6、rtofus公司,德國(guó))，垂直電泳和轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)(BioRad公司,美國(guó))，恒溫循環(huán)水浴箱，電子天平(Sartorius公司,德國(guó))，F(xiàn)orma-80℃低溫冰箱(Forma公司,美國(guó))，西門子-20℃冰箱(sietnens公司,德國(guó)),Eppendorf5415D微型離心機(jī)(Eppendorf公司,德國(guó))，Vortex2振蕩器(sI公司,美國(guó))。　　1.4實(shí)驗(yàn)方法　　1.4.1HIBD動(dòng)物模型的建立新生鼠乙醚吸入作為基礎(chǔ)麻醉,消毒皮膚,2%鹽酸普魯卡因頸部局部麻醉;切開皮膚及皮下組織,分離左側(cè)頸總動(dòng)脈,并用70號(hào)滅菌絲線雙線結(jié)扎;置鼠于常氧空氣中30m

7、in后,放進(jìn)含8%O2和92%N2混合氣體的低氧艙,流量為2L/min,處理3h,環(huán)境溫度為34℃,濕度為85%，低氧處理結(jié)束后的新生鼠放回含常氧的母鼠籠中飼養(yǎng)1h,模型建成;對(duì)照組僅行假手術(shù),不予頸總動(dòng)脈結(jié)扎和缺氧。兩組均于HIBD模型制成后6、24、48、72h分別處死動(dòng)物(各時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物5只),斷頭取新生鼠左腦，置于液氮中保存?！　?.4.2RTPCR分析(實(shí)時(shí)定量PCR)　　1.4.2.1總RNA的提取應(yīng)用Invitrogen公司Trizol總RNA提取試劑,按說明書提供的方法分別提取細(xì)胞總RNA。　　1.4.2.2cDNA第一鏈的合成配置RT

8、Mix，取上述cDNA為模版進(jìn)行RTPCR擴(kuò)增?！　?.4.3WesternBlot　　1