松茸多糖對(duì)輻射損傷小鼠免疫功能的保護(hù)作用

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1、松茸多糖對(duì)輻射損傷小鼠免疫功能的保護(hù)作用：王宏芳，李雪靜，浦昀，李金華，徐坤，宋秀玲，李娟【摘要】目的探討松茸多糖(PTM)對(duì)輻射損傷小鼠免疫功能的保護(hù)作用。方法90只健康雄性ICR小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、照射對(duì)照組(IC)和PTM組，每組30只。PTM組小鼠給予1200mg/kg劑量PTM灌胃，每天1次，連續(xù)7d;第8天給予IC組和PTM組動(dòng)物全身一次性照射，總劑量2.0Gy。檢測(cè)小鼠照射后第1、5、14天的脾指數(shù)、脾細(xì)胞對(duì)ConA誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)、巨噬細(xì)胞吞噬功能和抗體生成能力。結(jié)果與IC組比較，PTM組小鼠的脾指數(shù)、脾細(xì)胞對(duì)ConA的增殖

2、反應(yīng)、巨噬細(xì)胞吞噬功能和抗體生成能力均明顯增強(qiáng)(P<0.01)，且照射后第14天PTM組小鼠脾指數(shù)、脾細(xì)胞對(duì)ConA的增殖反應(yīng)能力、巨噬細(xì)胞吞噬率和抗體生成能力與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論松茸多糖對(duì)輻射所致的小鼠免疫功能損傷有明顯的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】松茸多糖;X射線(xiàn);免疫功能;脾指數(shù);巨噬細(xì)胞松茸(tricholomamatsutake)是一種純天然的食用菌類(lèi)，被譽(yù)為“菌中之王”，主要分布在日本、朝鮮半島以及我國(guó)東北和西南地區(qū)。松茸菌肉肥厚，有香氣，味道鮮美，而且富含蛋白質(zhì)、脂肪和多種氨基酸，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[

3、1]。此外，松茸具有強(qiáng)身、益腸胃、止痛、理氣化痰、驅(qū)蟲(chóng)等功效?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，松茸具有抗癌、抗炎等特殊作用[23]。松茸多糖(polysaccharidesoftricholomamatsutake,PTM)是從天然真菌植物松茸中分離得到的一種植物多糖。關(guān)于松茸提取物質(zhì)的免疫增強(qiáng)作用、抗腫瘤活性及治療支氣管炎等功能已有文獻(xiàn)報(bào)道[45]，而對(duì)于松茸多糖輻射防護(hù)作用的研究較少，主要源自本課題組的實(shí)驗(yàn)研究[67]。本研究通過(guò)觀察松茸多糖對(duì)輻射損傷小鼠免疫功能的影響，探討其輻射防護(hù)作用，為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1受試物松茸多

4、糖(PTM)是從盛產(chǎn)于吉林省長(zhǎng)白山區(qū)天然真菌-松茸中提取的多糖類(lèi)化合物。由本課題組采用索氏提取法提取，制備溶液時(shí)以生理鹽水溶解?！　?.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、分組及處理健康雄性ICR小鼠，體重(20±2)g，6～8周齡，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。小鼠按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、輻射照射組(IC)和PTM給藥組(PTM)3組，每組30只。NC組和IC組給予生理鹽水灌胃;PTM組給予劑量為1200mg/kg體重的PTM灌胃，每天1次，連續(xù)7d。第8天除NC組外，均接受X線(xiàn)照射。分別于照射后第1、5、14天，每組處死10只動(dòng)物，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。　　

5、1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器STT法。小鼠脾細(xì)胞濃度調(diào)成1×107個(gè)/mL，ConA濃度為10μg/mL，加于96孔平底培養(yǎng)板，37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)前4h每孔加入10μLMTT，培養(yǎng)結(jié)束后，吸出上清，每孔加入二甲亞楓100μL，570nm酶標(biāo)儀測(cè)定A值?！　?.4.3巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定小鼠腹腔注射100g/L淀粉懸著液1mL，24h后腹腔注射20mL/L雞紅細(xì)胞1mL，30min斷頭處死，腹腔注射0.2mL肝素注射液，吸腹腔液于玻片上展開(kāi)，濕盒中37℃溫育30min，瑞士-姬姆薩染色5min，PBS沖洗，自然干燥，顯微鏡下

6、觀察，計(jì)算巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)。　　吞噬百分率(%)=200個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬CRBC的巨噬細(xì)胞數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞數(shù)×100%　　吞噬指數(shù)=200個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬CRBC總數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞數(shù)×100%　　1.4.4B淋巴細(xì)胞功能的測(cè)定采用玻片小室法。小鼠腹腔注射50mL/LSRBC懸液0.2mL，4d后脫臼處死，取出脾臟，用磷酸緩沖生理鹽水制成單細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/mL，冰浴中保存?zhèn)溆?取0.24mL脾細(xì)胞懸液、0.24mL200mL/LSRBC懸液和0.92mL新鮮的豚鼠稀釋血清混勻，取混合液0.1mL加入到玻片小室中，平行樣2份

7、，小室兩端用石蠟封口后，置37℃溫箱中孵育1h，取出后顯微鏡下計(jì)數(shù)小室中形成的空斑數(shù)。結(jié)果換算：結(jié)果用106個(gè)脾細(xì)胞形成的PFC數(shù)表示?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2.1小鼠脾臟指數(shù)小鼠受到2.0Gy射線(xiàn)照射后，第1、5、14天小鼠脾指數(shù)明顯低于同期NC組(P<0.01);PTM組脾指數(shù)在照射后第1、5、14天明顯高于同期IC組(P<0.01)，且第14天PTM組脾指數(shù)與NC組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義(P>0.05，表1)。表1PTM對(duì)照射后不同時(shí)期小鼠脾指數(shù)的影響　　2.2脾細(xì)胞對(duì)ConA的反應(yīng)