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1、松茸對小鼠免疫功能影響的實驗研究王濤1張玲2中元英1、2（通訊作者）李麗娟2（1大理學院基礎(chǔ)醫(yī)學院云南大理671000；2大理學院公共衛(wèi)生學院云南大理671000）【摘要】目的探討松茸醇提取物的水溶液及脂溶液對小鼠免疫功能的影響。方法分別用松茸的水溶液及脂溶液給小鼠灌胃10d后，檢測小鼠免疫器官重量、單核-腹腔巨噬細胞吞噬能力、淋巴細胞增殖轉(zhuǎn)化及細胞因子的情況。結(jié)果胸腺指數(shù)測定和淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗陽性。結(jié)論松茸對正常小鼠有免疫增強作用。【關(guān)鍵詞】松茸免疫活性小鼠【中圖分類號】R392【文獻標識碼】A【文章編號】20
2、95-1752（2012）01-0237-02松茸因含有肽、出類以及多種酶類，被日木人成為“菇中之王”［1］。研究表明野生松茸可能增強機體免疫功能［2］。木研究擬通過采集云南野生松茸的水提劑和醇提劑為受試藥物進行小鼠的免疫活性測定，檢測其免疫功能及其可能的機制，現(xiàn)報道如下：一、材料和方法（一）材料1.受試藥品由大理學院藥學院藥物研究所提供的松茸乙醇提取物，提取率為25%?32%之間，使用冷凍法干燥。2.實驗動物由昆明醫(yī)學院動物中心提供的昆明種小鼠，共計515只，其中雄性259只，雌性256只，4?6周齡,體重18
3、?22g。實驗動物許可證號:scxk（滇）2005-0008。3.主要儀器和試劑（1）主要儀器連續(xù)波長酶標儀（PowerwaveXS,美國），C02培養(yǎng)箱（SANYO,日本），恒溫水浴箱（DKB-600B型，上海一恒科學儀器有限公司），電子天平（天J42003，上海上平儀器公司），臺式離心機（Mini-6K,杭州奧盛儀器有限公司），低速離心機（LC-4012,科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。（2）主要試劑二甲基亞砜DMS0（天津市風船化學試劑科技有限公司，批號:070707）,注射用環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)有限公
4、司，批號：20100307），乙醚（山西楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司，批號：101030）,小牛血清（北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司，批號:20100303），RPM1-1640（1nvitrogen公司，批號：1313945），植物血凝素PHA（SolarbioLifesciences,批號：P8090）,四唾哇鹽（MTT,又稱四甲基偶氮唑鹽｝。MouselL-2ELISA檢測試劑盒（Quantikine,批號：281038），MouseTNFαEUSA檢測試劑盒（Quantikine,批號：28
5、2254）。（二）方法1.實驗分組松茸（SR）樣品溶解吋使用超純水（ddH20）和二甲基亞砜（DMSO）兩種溶劑。140只小鼠分為14個小組，每組10只。分組情況為：SR水溶組（200mg/kg）,SR脂溶組（200mg/kg），SR+CTX水溶組（200mg/kg+40mg/kg），SR+CTX脂溶組（200mg/kg+40mg/kg）,每個大組根據(jù)性別分為雌雄兩個小組，另設(shè)溶劑對照組DMSO（20ml/kg）和ddH20（20ml/kg）各有雌雄兩個小組,環(huán)磷酰胺陽性對照組（CTX,40mg/kg）,雌雄兩個
6、小組。各組分別灌胃1次/d,連續(xù)10d后檢査松茸提取物對小鼠免疫器官、巨噬細胞吞噬功能、淋巴細胞增殖情況、細胞因子（IL-2,TNFα）的影響。2.檢測方法2.1臟器/體重比值測定：小鼠頸椎脫臼處死稱重后，立即取出胸腺和脾臟，用濾紙吸干血液后稱重，胸腺（脾）指數(shù)單位：胸腺（脾）質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量（mg/10g）。2.2吞噬功能：處死動物前3d，以5%的淀粉肉湯啟動小鼠巨噬細胞，采用半體內(nèi)法檢測腹腔巨噬細胞吞噬功能，以100個巨噬細胞中吞噬酵母菌的巨噬細胞數(shù)（吞噬率）及每個巨噬細胞吞噬酵母菌的個數(shù)（吞噬指
7、數(shù)）作為評價指標。2.3T淋巴細胞增殖測定（MTT法）：無菌取出脾臟，制成脾細胞懸液，用RPM11640不完全營養(yǎng)液洗漆3次，1000r/min離心10min,然后用完全營養(yǎng)液配成l×107/mI。取100μl加入96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)（每孔l×106個細胞，每個樣品做3個復孔）。再加入240mg/L的PHA20μl（使終濃度為40mg/L,同時設(shè)不加PHA的對照孔），置37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，每孔加入10μIMTT溶液（5g/L）,再繼續(xù)培養(yǎng)4h,離心，棄
8、上清液，然后加入30%DMS0100μl,充分振蕩后靜置20min,用酶標儀于波長570nm處測A值。2.4細胞因子的檢測將動物用乙醚麻醉以后，摘眼球取血。將血液靜置離心后，獲得血清，測IL-2,TNF&alPha;得指標，具體按試劑盒說明操作步驟進行。1.統(tǒng)計學分析應用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析。顯著性檢驗水準為α=0.05。二、結(jié)果及討論
