紅車(chē)軸草總異黃酮正交提取工藝和大孔樹(shù)脂吸附分離性能的研究

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1、紅車(chē)軸草總異黃酮正交提取工藝和大孔樹(shù)脂吸附分離性能的研究　紅車(chē)軸草TrifoliumpratenseL.為豆科多年生草本植物，現(xiàn)在我國(guó)已進(jìn)行大面積栽培。文獻(xiàn)報(bào)道其提取物具有抗腫瘤，治療胃潰瘍、胃癌、乳腺癌和骨質(zhì)疏松癥等作用[1]，其主要活性成分為異黃酮類(lèi)化合物，如大豆素、染料木素和鷹嘴豆芽素等[1，2]，這些異黃酮化合物具有植物雌激素樣作用，能夠雙向調(diào)節(jié)人體內(nèi)的激素水平，當(dāng)人體雌激素水平不足時(shí)，它與人體雌激素受體結(jié)合，產(chǎn)生弱雌激素作用，以彌補(bǔ)人體自身雌激素的不足;當(dāng)人體雌激素水平過(guò)高時(shí)，它與人體雌激素受體結(jié)合，

2、從而阻止人體自身所分泌的雌激素與受體結(jié)合，達(dá)到降低人體雌激素水平的目的，因而對(duì)婦女有關(guān)體內(nèi)激素方面的疾病具有預(yù)防、保健和醫(yī)療作用[3]，其提取物廣泛用作保健食品或功能食品的原料，因而備受人們關(guān)注。目前有關(guān)紅車(chē)軸草的提取工藝主要以乙醇為提取溶劑，由于乙醇系有機(jī)溶劑，消耗大、成本高、且生產(chǎn)過(guò)程存在易燃等安全隱患，為此我們根據(jù)紅車(chē)軸草異黃酮有一定的水溶性，改用水做提取溶劑，以總異黃酮為目標(biāo)，對(duì)其總異黃酮進(jìn)行了正交提取工藝研究，并對(duì)最佳提取工藝得到的提取液進(jìn)行了大孔吸附樹(shù)脂吸附分離性能研究，以期為紅車(chē)軸草總異黃酮的開(kāi)發(fā)

3、利用提供依據(jù)?！　?材料與儀器　　1.1材料紅車(chē)軸草(采自樂(lè)山師范學(xué)院)的植物地上部分，除去雜草，60℃鼓風(fēng)干燥7h，粉碎。　　1.2試劑鷹嘴豆芽素對(duì)照品(含量≥98%)：購(gòu)自Sigma公司;大孔樹(shù)脂D101，D102，D103，D104，購(gòu)自天津市大鈞科技開(kāi)發(fā)有限公司。試劑為分析純。　　1.3儀器電熱恒溫水浴鍋(H·H·S21-6C，上海醫(yī)療器械五廠);電子分析天平(FC204，上海精科實(shí)業(yè)有限公司);UV-762紫外分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞蓉生化儀器廠);SHZ-D(Ⅲ)循

4、環(huán)水式真空泵，索式提取器，電熱鼓風(fēng)干燥箱;植物粉碎機(jī)(FZ102，天津市泰斯特儀器有限公司)。　　2方法　　2.1總異黃酮的含量測(cè)定　　2.1.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇將鷹嘴豆素對(duì)照品、紅車(chē)軸草異黃酮提取液配成適當(dāng)濃度，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，二者吸收曲線類(lèi)似，均在258nm處有最大吸收，故選擇285nm為測(cè)定波長(zhǎng)?！　?.1.2對(duì)照品溶液的配置和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的鷹嘴豆芽素對(duì)照品4.0mg，置于50ml容量瓶中，加入95%的乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻，即可。精密吸取0.0，0.3

5、，0.6，0.9，1.2，1.8，2.4ml標(biāo)準(zhǔn)液，分別置于10ml容量瓶中，各自加入95%的乙醇1ml，加蒸餾水定容，搖勻，在波長(zhǎng)258.5nm處測(cè)定吸收值。得回歸方程為：C=0.00968A+0.00006，r=0.9991,結(jié)果表明，鷹嘴豆芽素對(duì)照品在2.4～19.2μg/ml范圍內(nèi)，濃度與吸光度線性關(guān)系良好?！　?.1.3樣品的含量測(cè)定按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，以鷹嘴豆芽素為對(duì)照品測(cè)定樣品的含量?！　?.2紅車(chē)軸草提取工藝效果的因素實(shí)驗(yàn)　　2.2.1單因素實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱(chēng)取0.30g紅車(chē)軸草粉末置于微型回流裝置中，

6、在不同條件下提取以確定提取因素變化范圍以及各因素的較佳值。通過(guò)測(cè)定提取液中總異黃酮含量，計(jì)算總異黃酮的提取率，以判斷最佳條件。　　2.2.2正交工藝實(shí)驗(yàn)以水的pH、浸提溫度、料液比和浸提時(shí)間4種因素作為參考對(duì)象，采用正交L9(34)，以獲取最佳工藝參數(shù)?！　?.3大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)　　2.3.1飽和吸附量的測(cè)定準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的用濾紙吸干表面水分的樹(shù)脂0.50g于50ml三角瓶中，精密加入1.06mg/ml的紅車(chē)軸草總異黃酮溶液10.0ml，在25℃，180r/min的條件下振蕩吸附24h。測(cè)定吸附后溶液中總

7、異黃酮的量，并按下式計(jì)算樹(shù)脂的飽和吸附量。飽和吸附量=(加入的總異黃酮-未吸附的總異黃酮)/樹(shù)脂的量　　2.3.2樹(shù)脂脫附率的測(cè)定將上述經(jīng)過(guò)24h靜態(tài)吸附總異黃酮的樹(shù)脂分離出來(lái)，吸干表面水分，然后加入70%的乙醇5.0ml，在25℃，180r/min的條件下振蕩脫附2h。測(cè)定脫附液中總異黃酮的量，按下式計(jì)算脫附率。脫附率(%)=洗脫出的總異黃酮/(加入的總異黃酮-未吸附的總異黃酮)×100%　　3.1.3料液比對(duì)提取效果的影響固定堿水pH為11，提取溫度為80℃，提取時(shí)間1h，提取1次，改變料液比。不同料液比對(duì)

8、總異黃酮提取效果見(jiàn)圖3。圖3料液比對(duì)總異黃酮提取率的影響從圖3可以看出料液比為1∶20時(shí)總異黃酮提取率最高，但與料液比1∶16時(shí)差別很小，考慮后續(xù)工藝處理成本，優(yōu)選1∶16的料液比?！　?.1.4提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響固定堿水pH為11，提取溫度為80℃，料液比為1∶16，提取1次，改變提取時(shí)間。不同提取時(shí)間對(duì)總異黃酮提取效果見(jiàn)圖4。圖4時(shí)間對(duì)總異黃酮提取率的影響從圖4可以看出隨提取