浮游植物葉綠素a 測定方法比較

《浮游植物葉綠素a 測定方法比較》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、馮菁等：浮游植物葉綠素a測定方法比較527浮游植物葉綠素a測定方法比較馮菁，李艷波，朱擎，吳為中*北京大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，北京100871摘要：選取規(guī)范方法、超聲波法、反復(fù)凍融法、延時(shí)提取法、熱丙酮法、丙酮加熱法、熱乙醇法、混合溶劑法8種常見的浮游植物葉綠素a的測定方法，以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的微囊藻（Microcystisaeruginosa）水華樣品為研究對象進(jìn)行葉綠素a含量的測定。從葉綠素a提取的完全性、測定數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、試驗(yàn)操作的簡便性等方面對8種方法進(jìn)行評價(jià)，并對葉綠素a結(jié)果測量的單色法和三色法進(jìn)行分析討論。試驗(yàn)結(jié)果表明，選取的8種測定方法中，包括國家標(biāo)準(zhǔn)方法在內(nèi)的大多數(shù)方法，存在操作耗

2、時(shí)長、過程復(fù)雜、葉綠素提取不完全的缺點(diǎn)；而丙酮加熱法測量葉綠素a的提取效率高、數(shù)據(jù)穩(wěn)定性好，操作耗時(shí)短、簡便，可推薦作為一種常用的浮游植物葉綠素a的測量方法；三色法和單色法測定方法的選取應(yīng)綜合考慮。關(guān)鍵詞：葉綠素a；測定方法；三色法；單色法中圖分類號：X173文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1672-2175（2008）02-0524-04馮菁等：浮游植物葉綠素a測定方法比較527在地表水環(huán)境的富營養(yǎng)化的研究中，葉綠素a(chlorophyll-a，以下簡稱Chl-a)是表征浮游植物生物量的最常用的指標(biāo)之一。Chl-a的實(shí)驗(yàn)室測量方法有分光光度法、熒光法、色譜法，其中以傳統(tǒng)的分光光度法應(yīng)用最為廣泛。

3、因我國普遍采用的Chl-a測量的標(biāo)準(zhǔn)方法[1]存在耗時(shí)長、提取不完全、步驟繁瑣等缺點(diǎn)，已有一些文獻(xiàn)報(bào)道提出了對標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)化改進(jìn)。這些方法的優(yōu)化改進(jìn)主要包括以下四個(gè)方面：（1）改變細(xì)胞破碎方式，如超聲波法[2]、反復(fù)凍融法[3]是用超聲或者反復(fù)凍融細(xì)胞的方法來破碎細(xì)胞，提取葉綠素a；（2）延長提取時(shí)間，如延時(shí)提取法[4,5]，利用溶劑長時(shí)間的溶出作用提高提取效率；（3）加熱提取法，如熱丙酮法[6]、丙酮加熱法[7]，是利用熱地溶劑提高葉綠素a的溶出量；（4）改變?nèi)軇?，如熱乙醇法[8]、混合溶劑法[9]等是利用其他的溶劑代替或部分代替丙酮來提高提取效率并減輕丙酮對操作者的傷害。目前雖然有一些關(guān)

4、于這些方法和標(biāo)準(zhǔn)方法比較的文章[10,11]，但是至今尚缺乏對這些方法的系統(tǒng)性比較評價(jià)，并很少提及后續(xù)測定的三色法和單色法兩種情況[12]。本文選取報(bào)道過的包括標(biāo)準(zhǔn)方法在內(nèi)的8種Chl-a的提取及測定方法，以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的微囊藻水華水樣為實(shí)驗(yàn)對象，進(jìn)行Chl-a的測定研究。從Chl-a提取的完全性、數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、操作的簡便性等方面對各種測定方法進(jìn)行評價(jià)，并比較單色法和三色法適應(yīng)性。為地表水環(huán)境的富營養(yǎng)化浮游植物的生物量的快速、穩(wěn)定且準(zhǔn)確的表征推薦監(jiān)測方法。1實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1材料微囊藻（Microcystisaeruginosa），購自中國科學(xué)院水生生物所淡水藻種庫。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微囊藻水華樣

5、品，其生長處于對數(shù)生長期?；瘜W(xué)試劑：90%丙酮、90％乙醇、丙酮乙醇混合液（體積比1∶1）、1mol·L-1鹽酸、碳酸鎂懸濁液。其他材料：醋酸纖維濾膜（0.45μm）、研缽、布氏漏斗、抽濾瓶、具塞刻度離心管(10mL)、移液槍、遮光用錫箔紙1.2主要儀器與設(shè)備真空泵、離心機(jī)、超聲波儀、恒溫水浴鍋、冰箱、UV-分光光度計(jì)等。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1Chl-a的提取將懸濁培養(yǎng)的微囊藻水華溶液混勻，每種Chl-a的提取方法分別平行吸取15mL微囊藻液樣品6份，將吸取15mL藻液，用0.45μm醋酸纖維濾膜真空泵抽濾，并滴加2滴碳酸鎂懸濁液。再分別參照相應(yīng)的參考文獻(xiàn)進(jìn)行Chl-a的提取。我國規(guī)范方法

6、參考文獻(xiàn)[1]；超聲波法參考文獻(xiàn)[2]；反復(fù)凍融法參考文獻(xiàn)[3]；延時(shí)提取法參考文獻(xiàn)[4,5]；熱丙酮法參考文獻(xiàn)[6]；丙酮加熱法參考文獻(xiàn)[7]；熱乙醇法參考文獻(xiàn)[8]、混合溶劑法參考文獻(xiàn)[9]。1.3.2吸光度測量方法與數(shù)據(jù)處理Chl-a的吸光度測量方法主要有單色法和三色法兩種。采用上述各種方法所獲得的提取液，分別采用三色法和單色法測定。單色法、三色法測定及馮菁等：浮游植物葉綠素a測定方法比較527Chl-a計(jì)算參考文獻(xiàn)[1，8，9]。使用SPSS12軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用8種不同的方法提取微囊藻樣品，并且對提取液分別采用三色法、單色法測定吸光度，求算Chl-

7、a值。采用SPSS12軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，獲得了每種提取法采用單色法、三色法測定對應(yīng)的Chl-a的含量均值、標(biāo)準(zhǔn)方差、變異系數(shù)等。不同提取、測定方法的Chl-a含量均值、標(biāo)準(zhǔn)方差的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。變異系數(shù)分析、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)等列于表1。ρ(Chl-a)/(mg·L-1)圖1不同提取、測定方法下Chl-a數(shù)據(jù)分析Fig.1MeasurementofChl-aconcentrationofdifferentmetho