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《探討黃芪、赤芍對小鼠免疫性肝損傷的保護作用》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、探討黃芪、赤芍對小鼠免疫性肝損傷的保護作用 肝臟擔負著物質代謝和解毒的功能,是機體重要的器官,因而也易受到病毒、細菌、酒精等攻擊,誘發(fā)肝臟損傷。肝損傷時肝枯否細胞的激活和各種炎癥介質、細胞因子和氧自由基、一氧化氮等物質大量產生,導致炎癥反應的發(fā)生。2006年選擇毒性低,價廉的常用傳統中藥黃芪與赤芍對免疫性肝損傷保護作用進行研究。黃芪活性成分黃芪甙具有抑制脂氧化酶,減少脂多糖(LPS)的生成,提高肝臟谷胱苷肽(GSH)含量,抗自由基,調節(jié)代謝,保護線粒體,尤其在調節(jié)免疫、抗腫瘤、抗病毒、改善肝臟供血等方面有
2、重要作用[1,2]。有報道赤芍對乙型肝炎患者肝臟損害有保護作用[3]。單藥黃芪及赤芍對動物免疫性肝損傷的保護作用國內均有報道,黃芪與赤芍二者聯合用藥的效果及機制未見報道,本研究使用卡介菌(BCG)和脂多糖(LPS)誘導小鼠免疫性肝損傷模型,選擇血清酶學測定及超氧化物歧化酶(SOD)、肝臟脂質過氧化物丙二醛(MDA)為測定指標,觀察黃芪注射液、赤芍注射液聯合應用對免疫性肝損傷的保護作用?! 。辈牧吓c方法 ?。保辈牧稀 ?.1.1動物 昆明系雄性小鼠,5~8周齡,體重(20±2)g,由黑龍江
3、中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供?! ?.1.2試劑 BCG由衛(wèi)生部生物制品研究所提供,LPS購自Sigma公司,黃芪注射和赤芍注射液為成都地奧九泓制藥廠藥品,SOD、MDA試劑盒為南京建成生物工程公司產品,谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑購于北京中生生物工程高科技公司。 1.1.3儀器 SpectraMAX190酶標儀、日立7600-020全自動生化分析儀?! ?.2方法 1.2.1分組 60只小鼠隨機分為5組,對照組、模型組、黃芪組、赤芍組、黃芪赤芍聯合組。對照
4、組腹腔注射性理鹽水15ml/kg,模型組和三個給藥組建立免疫性肝損傷模型。 1.2.2造?! ∈缶浳察o脈注射BCG1mg(0.2ml),3h后,給藥組分別腹腔注射相應藥物(黃芪15ml/kg,或赤芍15ml/kg,或黃芪和赤芍各7ml/kg),連續(xù)10d。最后1次給藥3h后,經尾靜脈注射LPS10μg(0.2ml),禁食不禁水,5h后,眼眶取血,分離血清,同時脫頸椎處死小鼠,迅速取出肝右葉組織制備成勻漿測MDA、SOD?!?.3血清酶活性測定 血清ALT,AST,LDH活性測定用日立7600-
5、020全自動生化分析儀測定;MDA和SOD的含量測定,嚴格按試劑盒說明書操作?! ?.4統計學處理 實驗數據用SPSS13.0統計軟件進行方差分析,實驗數據以x±s表示。 2結果 2.1血清ALT、AST及LDH模型組與對照組比較,血清中ALT、AST和LDH升高,表明造模型成功。三個用藥組與模型組比較各項指標均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01),說明黃芪注射液與赤芍注射液均能減少肝細胞內酶的逸出,對肝細胞有較明顯的保護作用;黃芪組強于赤芍組(P<0.01),聯合組作用更顯著,
6、見表1。表1各組小鼠血清ALT、AST及LDH水平(略)注:與對照組比較,(1)P<0.05,(2)P<0.01;與模型組比較,(3)P<0.05,(4)P<0.01;與黃芪組比較,(5)P<0.05;與赤芍組比較,(6)P<0.05,(7)P<0.01。 2.2肝組織SOD及MDA模型組小鼠肝勻漿SOD水平低于對照組(P<0.01),MDA含量高于對照組(P<0.05),表明造模成功。黃芪注射液與赤勺注射液均能提高肝組織SOD活力,減少MDA含量,見表2。表2各組小鼠肝組織SOD及MDA水平(略)注:
7、與對照組比較,(1)P<0.05,(2)P<0.01;與模型組比較,(3)P<0.05,(4)P<0.01;與黃芪組比較(5)P<0.01;與赤芍組比較(6)P<0.05,(7)P<0.01?! ?討論 多數學者認為慢性病毒性肝炎不是肝炎病毒對肝細胞的直接損傷,而是肝炎病毒侵入肝細胞后,激發(fā)人體免疫應答引起免疫性肝損傷。微量的BCG和LPS可誘導小鼠免疫性肝損傷模型類似于人類肝炎發(fā)生的病理生理過程,BCG首先致敏T淋巴細胞,特別是大量致敏肝內枯否細胞,使巨噬細胞聚集于肝臟,在注射LPS后激活致敏狀態(tài)的細
8、胞,使其釋放大量細胞因子,如一氧化氮、腫瘤壞死因子(TNF)、白細胞介素(IL)、自由基和白三烯等,進一步引起肝臟免疫損傷,因此是篩選治療肝病藥物較為理想的模型之一[7]?! C體通過酶系統與非酶系統產生自由基,自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸引發(fā)脂質過氧化作用,產生脂質過氧化物,如MDA,它能改變酶的功能,引起基因調控及表達錯誤,最終導致肝細胞變性、壞死。因此,MDA是體內脂質過氧化反應終產物,其水平的改變能間接地反映由于自