乙酰肝素酶和基質(zhì)金屬蛋白酶9在胃癌中的表達(dá)及臨床意義

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1、乙酰肝素酶和基質(zhì)金屬蛋白酶9在胃癌中的表達(dá)及臨床意義【關(guān)鍵詞】胃腫瘤;乙酰肝素酶;基質(zhì)金屬蛋白酶9;免疫組織化學(xué)[ABSTRACT]Objective:Toinvestigatetheclinicopathologicalsignificanceoftheexpressionofheparanase(Hpa)andMMP9,anditsrelationshiptoprogressingingastriccarcinoma.Methods：TheexpressionofHpaandMMP9munohistochemistrySABC

2、in65gastriccarcinomacasesand20adjacentnonneoplastictissues.ThepositiveratiosofHpaandMMP9atissuesandadjacentnonneoplastictissuesasphnodemetastasis.ThecorrelationanalysisofHpaandMMP9expressioningastriccarcinomatissueatissuethanthatinadjacentnonneoplastictissue(P<0.0

3、1),andtheirexpressionscorrelatedtotheinvasiondepthandlymphaticmetastasis(P<0.05),andalsoHpaexpressionatissue(rs=0.531，P=0.000).Conclusion：HpaandMMP9mayplayanimportantroleintheinvasionandmetastasisofgastriccarcinomaandcanbeaprognosticindicator.　　[KEYatrixmetalloprotein

4、ase9;Immunohistochemistry　　腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的多步驟過程。乙酰肝素酶(Hpa)是目前已確定的唯一能夠降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因(HSPG)的蛋白酶,通過特異性降解HSPG發(fā)揮其促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用;基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinases9，MMP9)是一種鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，主要降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中的膠原蛋白，在破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的屏障作用、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中同樣具有作用。HpamRNA的檢測在多種腫瘤中已有研究報道，但目前聯(lián)合檢測Hp

5、a和MMP9在胃癌中的表達(dá)少有報道，本實驗對65例胃癌切除標(biāo)本Hpa和MMP9的表達(dá)進(jìn)行了檢測，現(xiàn)報道如下?！　?材料與方法　　1.1研究對象　　選取河源市人民醫(yī)院2003～2005年胃癌手術(shù)切除標(biāo)本65例，男性47例，女性18例，年齡35～78歲，中位年齡60歲，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例。所有病例術(shù)后均經(jīng)病理證實。另取癌旁非瘤組織20例作為對照，癌旁組織距離腫瘤邊緣不小于5cm。　　1.2Hpa、MMP9的檢測　　采用免疫組化SABC法進(jìn)行檢測。Hpa抗體、即用型SABC免疫組化染色試劑盒及DAB顯色試劑盒購于武漢博士得生物工程有

6、限公司;兔抗人MMP9多克隆抗體為北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，均在4℃冰箱保存。用已知的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照?！　?.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)　　1.3.1HpaHpa以細(xì)胞膜和/或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以染色強度和陽性細(xì)胞比例評定陽性表達(dá)。參照Friedmann等[1]的方法，每張切片隨機觀察5個視野，每個視野觀察100個腫瘤細(xì)胞，計數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中陽性染色的細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞記數(shù)僅限于腫瘤細(xì)胞染色。染色強度分級如下：無著色為0，淡黃色為1，黃色及更深顏色為2;陽性細(xì)胞數(shù)分級為:陽性細(xì)胞數(shù)小于50

7、%為0，50%～75%為1，>75%為2。染色強度分級與陽性細(xì)胞數(shù)分級兩項得分相乘結(jié)果≥2為陽性表達(dá)?！　?.3.2MMP9MMP9以細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，參照Liaball等[2]的方法，每張切片隨機觀察5個視野，每個視野觀察100個腫瘤細(xì)胞，計數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中陽性染色的細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞計數(shù)僅限于腫瘤細(xì)胞染色，10%及以上細(xì)胞陽性染色的切片為陽性，10%以下陽性染色的切片為陰性?！　?.4統(tǒng)計學(xué)處理　應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，行χ2檢驗或精確概率法及Spearman相關(guān)性檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0

8、.05?！　?結(jié)果　　2.1Hpa的表達(dá)　　Hpa蛋白陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜，腫瘤間質(zhì)中的血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也偶有陽性表達(dá)，胃癌中Hpa的陽性表達(dá)率為60%(39/6