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《hplc-ms-ms法測(cè)定人血漿中氨溴索濃度》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線(xiàn)閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、HPLC-MS/MS法測(cè)定人血漿中氨溴索濃度[摘要]目的建立測(cè)定人血漿中鹽酸氨溴索濃度的液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS-MS)。方法血漿中加入內(nèi)標(biāo)曲馬多,經(jīng)液液萃取后離心,取上清液吹干,再用甲醇復(fù)溶。色譜系統(tǒng):SYMMETRYTMC18柱(150mm×?3.9mm,?5μm),流動(dòng)相由20mmol•l-1乙酸銨水溶液∶甲醇(10∶90)組成,流速為0.6ml•min-1。質(zhì)譜檢測(cè)方式:多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。用于定量分析的離子對(duì)分別為質(zhì)荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.
2、1(內(nèi)標(biāo)曲馬多)。結(jié)果鹽酸氨溴索線(xiàn)性范圍為0.1~400.0ng•ml-1,最低檢測(cè)濃度為0.1ng•ml-1;標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)r≥0.99。結(jié)論HPLC-MS/MS法具有專(zhuān)屬、靈敏、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單及快速的優(yōu)點(diǎn),可以用于測(cè)定人血漿氨溴索濃度。?[關(guān)鍵詞]鹽酸氨溴索;液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法;血漿?[中圖分類(lèi)號(hào)]R446.11;R917[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1671-7562(2008)04-0282-03鹽酸氨溴索(ambroxolhydrochloride)又名鹽酸溴環(huán)己胺醇,化學(xué)名為反-4-7[(2-氨基-3,5-二溴
3、苯甲基)氨基]環(huán)己醇鹽酸鹽,是溴己新的體內(nèi)活性代謝物。氨溴索是一種呼吸道潤(rùn)滑祛痰藥,能促使呼吸道表面活性物質(zhì)形成,調(diào)節(jié)漿液性與黏液性物質(zhì)的分泌,增加中性黏多糖分泌,減少酸性黏多糖合成,并促進(jìn)代謝,使呼吸道黏液理化性質(zhì)趨正常,利于排出[1]。?本實(shí)驗(yàn)參考國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)[2-3],以曲馬多為內(nèi)標(biāo),旨在建立液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS-MS)測(cè)定人血漿樣品中的氨溴索含量的方法,適用于該藥臨床口服給藥的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度的研究,為臨床用藥提供參考。?1資料與方法?1.1藥品與試劑?氨溴索和曲馬多(內(nèi)標(biāo))同為中國(guó)生物藥品檢定所生產(chǎn),氨溴索批號(hào):20
4、0301,純度為99.5%;曲馬多批號(hào):171242-200302,純度為97.9%。甲醇為SKChemicals產(chǎn)品,HPLC級(jí);滅菌注射用水為安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品;乙醚、二氯甲烷、碳酸鈉及乙酸銨均為中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?;瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品,均為分析純。空白血漿由蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院血庫(kù)提供,于-30℃條件下冷凍保存。?1.2儀器及色譜條件?測(cè)定儀器為API-4000三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀(AppliedBiosystemSciex,USA),使用Agilent71200高效液相色譜儀、電噴霧離子源(ESI)及Analyst1.42數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);
5、Drict-Q5超純水機(jī)(Millipore);VORTEX-2渦旋振蕩器;Heraeus低溫高速離心機(jī);AS7240B超聲波振蕩儀;SartoriusBP121S型分析天平和TECHNEDRI-BlockDB-30氮吹儀。?色譜條件:Waters公司SYMMETRYTMC18?(150mm×3.9mm,5μm)色譜柱,PhenomenexSecurityGuardTMC18預(yù)柱;流動(dòng)相由20mmol•l-1乙酸銨水溶液∶甲醇(10∶90)組成;流速為0.6ml•min-1;柱溫為25℃;進(jìn)樣量為10μl。?質(zhì)譜條件:電噴霧離
6、子化源(ESI);離子噴射電壓:5000V;離子源溫度:500℃;GS1:45psi;GS2:?35psi;碰撞活化氣(CAD)壓力:6psi;氣簾氣(CUR)壓力:20psi;掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的解簇電壓(DP)分別為56V和?75V;碰撞能量(CE)分別為30eV和75eV;用于定量分析的離子反應(yīng)分別為質(zhì)荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.1(內(nèi)標(biāo)曲馬多)。?1.3血漿樣品處理?取血漿樣品100μl,加甲醇20μl、內(nèi)標(biāo)曲馬多標(biāo)準(zhǔn)溶液(20ng•ml-1
7、)50μl、碳酸鈉(?0.1mol•l-1)溶液1007μl、提取試劑(乙醚∶二氯甲烷=2∶1,v/v)3ml,渦流混合30s。振蕩?2min,離心?5min?(6000r•min-1),取上清液于30℃下氮?dú)獯蹈?,殘余物?50μl甲醇溶解,取10μl進(jìn)行分析。?2結(jié)果?2.1特異性?本試驗(yàn)所采用的HPLC-MS/MS條件,氨溴索保留時(shí)間3.28min,內(nèi)標(biāo)曲馬多保留時(shí)間2.97min。氨溴索和曲馬多峰形良好,無(wú)雜峰干擾,基線(xiàn)平穩(wěn)??瞻籽獫{中的內(nèi)源性物質(zhì)未干擾氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的測(cè)定。圖1為氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的質(zhì)譜圖,圖2為
8、血漿中氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的典型色譜圖。2.2線(xiàn)性范圍?取空白血漿100μl,依次加入不同濃度的氨溴索標(biāo)準(zhǔn)溶液