hplc-ms-ms法測定人血漿中氨溴索濃度

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1、HPLC-MS/MS法測定人血漿中氨溴索濃度［摘要］目的建立測定人血漿中鹽酸氨溴索濃度的液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS-MS)。方法血漿中加入內(nèi)標(biāo)曲馬多，經(jīng)液液萃取后離心，取上清液吹干，再用甲醇復(fù)溶。色譜系統(tǒng)：SYMMETRYTMC18柱(150mm×?3.9mm，?5μm)，流動相由20mmol•l-1乙酸銨水溶液∶甲醇(10∶90)組成，流速為0.6ml•min-1。質(zhì)譜檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。用于定量分析的離子對分別為質(zhì)荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.

2、1(內(nèi)標(biāo)曲馬多)。結(jié)果鹽酸氨溴索線性范圍為0.1~400.0ng•ml-1，最低檢測濃度為0.1ng•ml-1；標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r≥0.99。結(jié)論HPLC-MS/MS法具有專屬、靈敏、準(zhǔn)確、操作簡單及快速的優(yōu)點，可以用于測定人血漿氨溴索濃度。?［關(guān)鍵詞］鹽酸氨溴索；液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法；血漿?［中圖分類號］R446.11；R917［文獻標(biāo)識碼］A［文章編號］1671-7562(2008)04-0282-03鹽酸氨溴索(ambroxolhydrochloride)又名鹽酸溴環(huán)己胺醇，化學(xué)名為反-4-7［(2-氨基-3,5-二溴

3、苯甲基)氨基］環(huán)己醇鹽酸鹽，是溴己新的體內(nèi)活性代謝物。氨溴索是一種呼吸道潤滑祛痰藥，能促使呼吸道表面活性物質(zhì)形成，調(diào)節(jié)漿液性與黏液性物質(zhì)的分泌，增加中性黏多糖分泌，減少酸性黏多糖合成，并促進代謝，使呼吸道黏液理化性質(zhì)趨正常，利于排出［1］。?本實驗參考國內(nèi)外文獻［2-3］，以曲馬多為內(nèi)標(biāo)，旨在建立液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS-MS)測定人血漿樣品中的氨溴索含量的方法，適用于該藥臨床口服給藥的藥代動力學(xué)和生物利用度的研究，為臨床用藥提供參考。?1資料與方法?1.1藥品與試劑?氨溴索和曲馬多(內(nèi)標(biāo))同為中國生物藥品檢定所生產(chǎn)，氨溴索批號：20

4、0301，純度為99.5%；曲馬多批號：171242-200302，純度為97.9%。甲醇為SKChemicals產(chǎn)品，HPLC級；滅菌注射用水為安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；乙醚、二氯甲烷、碳酸鈉及乙酸銨均為中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品，均為分析純?？瞻籽獫{由蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院血庫提供，于-30℃條件下冷凍保存。?1.2儀器及色譜條件?測定儀器為API-4000三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀(AppliedBiosystemSciex，USA)，使用Agilent71200高效液相色譜儀、電噴霧離子源(ESI)及Analyst1.42數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；

5、Drict-Q5超純水機(Millipore)；VORTEX-2渦旋振蕩器；Heraeus低溫高速離心機；AS7240B超聲波振蕩儀；SartoriusBP121S型分析天平和TECHNEDRI-BlockDB-30氮吹儀。?色譜條件：Waters公司SYMMETRYTMC18?(150mm×3.9mm，5μm)色譜柱，PhenomenexSecurityGuardTMC18預(yù)柱；流動相由20mmol•l-1乙酸銨水溶液∶甲醇(10∶90)組成；流速為0.6ml•min-1；柱溫為25℃；進樣量為10μl。?質(zhì)譜條件：電噴霧離

6、子化源(ESI)；離子噴射電壓：5000V；離子源溫度：500℃；GS1：45psi；GS2：?35psi；碰撞活化氣(CAD)壓力：6psi；氣簾氣(CUR)壓力：20psi；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的解簇電壓(DP)分別為56V和?75V；碰撞能量(CE)分別為30eV和75eV；用于定量分析的離子反應(yīng)分別為質(zhì)荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.1(內(nèi)標(biāo)曲馬多)。?1.3血漿樣品處理?取血漿樣品100μl，加甲醇20μl、內(nèi)標(biāo)曲馬多標(biāo)準(zhǔn)溶液(20ng•ml-1

7、)50μl、碳酸鈉(?0.1mol•l-1)溶液1007μl、提取試劑(乙醚∶二氯甲烷=2∶1，v/v)3ml，渦流混合30s。振蕩?2min，離心?5min?(6000r•min-1)，取上清液于30℃下氮氣吹干，殘余物加150μl甲醇溶解，取10μl進行分析。?2結(jié)果?2.1特異性?本試驗所采用的HPLC-MS/MS條件，氨溴索保留時間3.28min，內(nèi)標(biāo)曲馬多保留時間2.97min。氨溴索和曲馬多峰形良好，無雜峰干擾，基線平穩(wěn)。空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)未干擾氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的測定。圖1為氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的質(zhì)譜圖，圖2為

8、血漿中氨溴索和內(nèi)標(biāo)曲馬多的典型色譜圖。2.2線性范圍?取空白血漿100μl，依次加入不同濃度的氨溴索標(biāo)準(zhǔn)溶液