液氮保存對人主動脈瓣組織細胞活力的影響論文

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時間:2018-07-22

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1、液氮保存對人主動脈瓣組織細胞活力的影響論文.freelo不同時間段的瓣膜組織細胞活力及組織培養(yǎng)細胞生長情況的變化,為臨床適用的人同種主動脈瓣的適宜保存期限提供實驗依據(jù).方法選?。?8~35)歲健康成年男性腦死亡30min內取材的主動脈瓣膜20個.依據(jù)保存時間分為10組,Ⅰ組為新鮮對照組,取材后直接供實驗用,Ⅱ~Ⅹ組為冷凍保存組,分別為冷凍保存1,3,6.freelo的瓣膜,每組2個瓣膜共6個瓣葉.冷凍保存組各組瓣膜緩慢降溫(1℃min-1),液氮中保存,實驗時進行快速復溫.瓣葉剪為細小組織塊,一半置

2、入培養(yǎng)瓶中做組織培養(yǎng),相差顯微鏡下觀察其組織細胞生長情況;另一半組織塊用胰酶消化,光鏡下做細胞計數(shù)并計算其細胞活力.結果Ⅰ組的組織細胞活力最高(93.8%),Ⅱ~Ⅹ組細胞活力均較Ⅰ組明顯減低(67.3%vs93.8%P0.05);Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ組細胞活力較Ⅱ~Ⅶ組瓣膜各組明顯減低(52.4%vs76.5%P0.05).Ⅰ組組織細胞1o瓣膜組織細胞生長較新鮮瓣膜組稍晚,但組織細胞活力仍較高;液氮保存18~24mo瓣膜組織細胞活力明顯減低,組織細胞生長緩慢,因此瓣膜組織活性及瓣膜耐久性可能減低.據(jù)此可認為,

3、人同種主動脈瓣的適宜保存期限為15mo以內.Keyanaorticvalvescryopreservedinliquidnitrogenat-196℃.METHODST18to35yearsoldhealthyadultheartsinafterthedeterminationofbraindeath,GroupⅡtoGroupⅩorespectively.Thefreshvalvesinedimmediatelyafterprocurement.Allthecryopreservedvalvese

4、nm×1mm×1mm.Halfofthetissues-berofviableandnonviablecellsainingtissuesediumcontaining100mLL-1fetalcalfserumat37℃toobservethecapacityofcellproliferationonthe7thand28thday.RESULTSFreshvalvesseemedtohavethehighestcellsurvivalrateofallthegroups(93.8%).Incry

5、opreservationgroups,thereGroupⅡtoGroupⅩshoGroupⅠ(67.3%vs93.8%P0.05).ValvesfromGroupⅧ,ⅨandⅩshoGroupⅠtoGroupⅦ(52.4%vs76.5%P0.05).CellsinGroupⅠgreofculturecontainerduringthefourthiddleofthesecondostpartofthecontainerbot-tom.InGroupⅧ,ⅨandⅩ,cellsberarkedlyd

6、ecreasedduringthefourthanaorticvalvetissues.Valvesthatarepreservedfor18ormoremonthshaveloaticdecreaseincellularcapacityofpro-liferation.Accordingtotheresultsofourexperiments,thedurabilityofvalvescryopreserved18ormoremonthsin內取材的主動脈瓣20個.供體心臟均在腦死亡后30min內

7、無菌取出,剪開心臟四腔,4℃生理鹽水沖洗3次,用3層無菌塑料袋盛入供心并逐層線扎,冰壺帶回,在無菌臺上修剪成帶瓣管道.實驗分為新鮮瓣膜對照組(Ⅰ組)和冷凍保存組(Ⅱ~Ⅹ組).對照組取材后不入液氮內保存,瓣葉剪下后直接供實驗用.冷凍保存組依據(jù)在液氮((196℃)中保存時間分為Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ組,分別為冷凍保存1,3,6,9,12,15,18,21,24mo的瓣膜.每組2個瓣膜共6個瓣葉.1.2方法修剪備用的帶瓣主動脈管道浸入含低濃度抗生素和二甲基亞砜(DMSO)的RPMI1640營養(yǎng)

8、液中,3層無菌耐低溫塑料袋分別束扎,外裹錫箔袋,標記時間后,置入4℃冰箱中2h,再置入液氮蒸氣中使瓣膜緩慢降溫,最后放入液氮中長期保存,降溫速率保持在1℃min-1左右.定期添加液氮,使瓣膜始終保持在-196℃.實驗當日取保存不同時間的帶瓣管道在37℃水浴箱中快速復溫5min,然后掀去包裹薄膜,再在37℃無菌生理鹽水中快速復溫,復溫中不斷輕柔翻動帶瓣管道,使其各部位的溫度均勻上升.新鮮組瓣膜及冷凍復溫后各組瓣膜均在超凈工作臺上無菌取出,剪切瓣葉并觀察其大體形態(tài),分切瓣

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