hplcelsd法測定桔梗中3種桔梗皂苷的含量

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1、HPLCELSD法測定桔梗中3種桔梗皂苷的含量：葉靜，肖美添，湯須崇，黃雅燕【摘要】目的建立測定桔梗藥材中桔梗皂苷D、D3、E含量的方法。方法采用高效液相色譜蒸發(fā)光激光閃射檢測器(HPLCELSD)法，HypersilC18柱(5μm，.6mm×150mm)，以乙腈-水為流動相梯度洗脫，流速1.0mL/min，ELSD漂移管溫度113℃，載氣(N2)流速3.0L/min?！〗Y(jié)果桔梗皂苷D、D3、E的線性范圍分別為13.78～275.6μg/mL(r=0.9995)、8.40～168.0μg/mL(r=0.9997)、12.02～240.4μg/mL(r=0.

2、9996)，平均回收率(n=5)為98.3%、99.4%和101.3%。結(jié)論本法操作簡便，結(jié)果準確可靠，可用于桔梗皂苷D、D3、E含量的測定。【關(guān)鍵詞】桔梗;桔梗皂苷;HPLCELSD　　ABSTRACT:ObjectiveToestablishaquantitativemethodtodeterminethecontentofplatycodinD,D3andEinRadixplatycodi.MethodsHighperformanceliquidchromatagraphyevaprorativelightscatteringdector(HPLCEL

3、SD)method,4.6mm×150mm)obilephaseinagradientprogram;floL/min,thetemperatureofdrifttubein.ResultsThelinearrangesofplatycodinD,D3andEL(r=0.9995),8.40-168.0μg/mL(r=0.9997)and12.02-240.4μg/mL(r=0.9996),respectively.Theaveragerecoveries(n=5)ethodisconvenient,accurateandreliable,andcanbeused

4、forthedeterminationofplatycodinD,D3andEinRadixplatycodoi.　　KEY102色譜工作站)，AlltechELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測器，超純水器(美國Milipore公司)。供試的桔梗藥材購自江西省樟樹藥材市場，經(jīng)本校劉青副教授鑒定為Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根;對照品桔梗皂苷D、D3、E由本實驗室制備型HPLC制備而得，經(jīng)紅外光譜(IR)、質(zhì)譜(MS)、1H核磁共振(1HNMR)、13C核磁共振(13CNMR)等手段鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC法測定含量，以

5、峰面積歸一化法計算，含量均大于99.0%?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱為HypersilC18柱(5μm，4.6mm×150mm);流動相：乙腈(A)水(B)，梯度洗脫(0～15min，A由15%線性變化到25%;15～30min，A由25%線性變化到35%;30～50min，A由35%變化到100%);流速1.0mL/min;柱溫為室溫;進樣量：20μL;ELSD檢測器檢測參數(shù)：漂移管溫度113℃;載氣(N2)流速3.0L/min。色譜圖見圖1?！　?.2對照品溶液的制備精密稱取對照品桔梗皂苷D6.89mg、桔梗皂苷D34.20mg、桔梗皂苷E6.

6、01mg，置于同一25mL量瓶中加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。實驗前過0.45μm濾膜，備用?！　?.3供試品溶液的制備精密稱取干燥粉碎過60目篩的桔梗藥材1.0g，加入30mL甲醇超聲提取3次，每次30min。合并提取液，濃縮蒸干，用甲醇定容至25mL量瓶中，作為供試品溶液。實驗前供試品溶液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，備用?！　D1對照品(A)和湖南省樣品(B)的HPLC色譜圖　　Fig.1HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andasample(B)　　1：桔梗皂苷E;2：桔梗皂苷D3;3：桔梗

7、皂苷D?！　?.4線性關(guān)系考察分別精密量取混合對照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10mL于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣20μL。分別以峰面積的積分值為縱坐標，對照品的濃度(μg/mL)為橫坐標，得桔梗皂苷D、D3、E的線性回歸方程分別為：　　Y=2440.9X-2291.2r=0.9995　　Y=3197.7X-943.40r=0.9997　　Y=1007.2X-790.38r=0.9996　　線性范圍分別為13.78～275.6、8.40～168.0、12.02～240.4μg/mL?！　?.5精密度試驗精密吸取同一供試品溶液20μL，連續(xù)進

8、樣5次，測