hplc-elsd法測定甘草中3種甘草皂苷的含量

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1、HPLC?ELSD法測定甘草中3種甘草皂苷的含量:葉靜 肖美添,湯須崇,黃雅燕【摘要】目的建立測定甘草藥材中甘草皂苷G2、甘草酸銨、烏拉爾甘草皂苷B含量的方法。方法采用HPLC?ELSD法,HypersilC18柱(5μm,4.6mm×150mm),以甲醇?乙酸銨水溶液(0.2mol/L)?冰乙酸(體積比65∶34∶1)為流動相,流速1.0mL/min,ELSD漂移管溫度110℃,載氣(N2)流速2.8L/min。結(jié)果甘草皂苷G2、甘草酸銨、烏拉爾甘草皂苷B的線性范圍分別為6.02~120.4,13.22~264.4,6.32~126.4μg/mL(r值分別為0.9996,

2、0.9997,0.9998),平均回收率(n=6)為100.6%,100.8%和99.87%。結(jié)論本法簡便,重現(xiàn)性好,可用于甘草中甘草皂苷G2、甘草酸銨、烏拉爾甘草皂苷B含量的測定?!娟P鍵詞】甘草;甘草皂苷G2;甘草酸銨;烏拉爾甘草皂苷B;HPLC?ELSDAbstract:ObjectiveoestablishaquantitativemethodfordeterminingthecontentofsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBinGlycyrrhizauralensis.MethodHPLC?ELSDme

3、thodplesn(5μm,4.6mm×150mm)byusingmethanol?0.2mol·L-1ammoniumacetate?glacialaceticacid(65∶34∶1)asmobilephase.ThefloL·min-1andthetemperatureofdrifttubein-1.ResultsThelinearrangesofsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBL-1,respectivelyandtheiraveragerecoveries(n=6)ethodisconvenient,

4、reliableandcanbeusedforanalyzingsaponinG2,ammoniumglycyrrhizinateanduralsaponinBinGlycyrrhizauralensis.  Keymoniumglycyrrhizinate;uralsaponinB;HPLC?ELSD 甘草是豆科植物GlycyrrhizauralensisFisch的干燥根莖和根,是常用且重要的中藥材,具補脾和胃、益氣復脈之功效[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)甘草具有祛痰、止咳、利膽、解痛、降胃酸、抗炎、抗?jié)儭⒖垢味舅匾约翱拱┑人幚碜饔肹2]。近年來還發(fā)現(xiàn)其具有體外抗甲肝病毒、人體

5、免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性,臨床上用于治療慢性肝炎和艾滋病[3,4]。我國野生甘草主要生長在“三北”地區(qū),尤其是內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、寧夏分布較多。甘草中主要有效成分為甘草皂苷類和黃酮類化合物[5]。有關甘草有效成分分離測定,文獻報道的有TLC法[6]、GC法[7]和HPLC法[8],為了更好地控制甘草的品質(zhì),本文采用HPLC?ELSD法測定甘草中3種皂苷類成分甘草皂苷G2、甘草酸銨、烏拉爾甘草皂苷B的含量?! ?儀器與試藥  ShimadzuSPD?10AVP高效液相色譜儀(配備CBM?102色譜工作站),AlltechELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測器,超純水器(M

6、ilipore)?! 「什菟幉馁徸越魇≌翗渌幉氖袌觯?jīng)本實驗室鑒定;甘草皂苷G2、甘草酸銨和烏拉爾甘草皂苷B對照品為本試驗室用制備型HPLC分離而得,經(jīng)IR、MS、1H?NMR、13C?NMR等手段(方法)鑒定結(jié)構(gòu),HPLC法測定含量,以峰面積歸一化法計算,含量均大于99.0%。乙腈、甲醇(色譜純,Merck公司),水為超純水,其余試劑均為分析純?! ?方法與結(jié)果  2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗  色譜柱:HypersilC18柱(5μm,4.6mm×150mm);流動相:甲醇?0.2mol/L乙酸銨水溶液?冰乙酸(體積比65∶34∶1);流速1.0mL/min;柱溫為

7、室溫;進樣量:20μL;ELSD檢測器檢測參數(shù):漂移管溫度110℃;載氣(N2)流速2.8L/min。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計算應不低于2000,在此條件下甘草皂苷G2、甘草酸銨、烏拉爾甘草皂苷B達到基線分離,且各自峰形較好,色譜圖見圖1。2.2對照品及供試品溶液的制備  2.2.1對照品溶液的制備精密稱取對照品甘草皂苷G23.01mg、甘草酸銨6.61mg、烏拉爾甘草皂苷B3.16mg,置同一25mL量瓶中加適量甲醇溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得混合對照品溶液。實驗前以0.45μm濾膜濾過,備用?! ?.2.2供試

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