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1、RNAi沉默EGFR基因?qū)β殉舶┓暖熋舾行缘挠绊懽髡撸毫诌h洪吳永忠李少林郭啟帥羅茜【摘要】目的探討表皮生長因子受體(EGFR)基因?qū)β殉舶┓暖熋舾行缘脑鰪娮饔谩７椒?gòu)建針對EGFR基因序列特異性短發(fā)夾狀RNA(shRNA)表達載體，應用卵巢癌SKOV3細胞建立裸鼠移植瘤模型，隨機分為對照組、單純放療組、基因放療組，采用6MVX線照射裸鼠瘤組織，監(jiān)測瘤體積，測量瘤質(zhì)量，取瘤組織行RTPCR、Western印跡、免疫組化、電鏡檢測。結(jié)果治療后三組瘤體積差異均顯著(均P<0.01)，單純放療組、基因放療組的抑瘤率分別為2

2、8.1%、46.1%，基因放療組EGFR基因的表達明顯下調(diào)，透射電鏡下瘤組織凋亡、壞死最明顯。結(jié)論動物實驗證實RNAi沉默EGFR基因明顯提高卵巢癌的放療敏感性?！娟P鍵詞】EGFR基因;RNA干擾;放療;卵巢癌　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)geneontheradiosensitivityofovariancancerbyRNAitechnology.MethodsEGFRgenesequences

3、pecificshRNAexpressionvectorwereconstructed.TumoranimalmodelwithovariancancerSKOV311cellswereestablishedandthenudemicewererandomlydividedintocontrol,radiotherapyandgeneradiotherapygroups.Theovariancancertissuewasirradiatedby6MVXray.Tumorvolumeandtumorweightwere

4、measured.RTPCR,Westernblot,immunohistochemistryandelectronmicroscopywereusedtodetectedcancertissue.ResultsTherewereobviousdifferenceamongthreegroupsintumorvolume(P<0.01).Theinhibitingtumorrateoftheradiotherapyandthegeneradiotherapygroupswere28.1%and46.1%resp

5、ectively.TheexpressionofEGFRgeneingeneradiotherapygroupwassignificantlydecreasedandthetumorcellapoptosis,necrosiswereallobvoius.ConclusionsSilencedEGFRgenebyRNAicansignificantlyimprovetheradiosensitivityofovariancancer.　　【Keywords】EGFRgene;RNAinterference;Radiot

6、herapy;Ovariancancer11　表皮生長因子受體(EGFR)的高表達與腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移、放化療敏感度下降密切相關，可作為診斷及判斷預后的指標，許多阻滯和下調(diào)EGFR的方法被用來抑制腫瘤增殖以改善預后，并已顯示出初步療效及良好的安全性，因此EGFR成為目前公認的腫瘤基因治療的重要靶位〔1〕。本實驗選擇放療相對不敏感的卵巢癌SKOV3細胞為研究對象，以目前分子靶向治療中的EGFR基因為靶點，采用RNA干擾(RNAi)技術，探討EGFR基因與卵巢癌放療敏感性的關系，實驗初步顯示了RNAi技術在卵巢癌基因放療中的潛

7、在作用，為腫瘤治療提供新策略?！　?材料與方法　　1.1主要材料卵巢癌SKOV3細胞株購自中科院上海細胞生物研究所;BALB/C雌性裸鼠購自北京維通利華公司。脂質(zhì)體lipofectamine2000購自Invitrogene公司;去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑購自Omega公司;鼠抗EGFR單克隆抗體購自SantaCruz公司;蛋白提取試劑盒購自賽百盛公司;免疫組化試劑盒及SDSPAGE凝膠購自博士德公司;總RNA提取試劑購自華舜公司;RTPCR試劑盒購自寶生公司?！　?.2方法　　1.2.1靶向EGFR基因shRNA表達載體的

8、構(gòu)建根據(jù)siRNA的設計原則及質(zhì)粒載體pGenesil的多克隆位點特點，選擇EGFR家族同源性基因片段(TGGGGTCGTCAAAGACGTT)為模板，利用美國Dharmacon公司siRNA設計軟件，獲得靶向EGFR基因序列特異性shRNA的質(zhì)粒載體(pGenesilEGFR)：正義鏈：5′UGGG