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1、藥物生物技術(shù)PharmaceuticalBiotechnology2008,150):59^63竣甲基殼聚糖的含量測(cè)定鄒巧根‘,2，韋萍‘’，鄒珊，，李著2，歐陽(yáng)平凱，(1.南京工業(yè)大學(xué)制藥與生命科學(xué)學(xué)院，江蘇南京210009;2.中國(guó)藥科大學(xué)，分析測(cè)試中心，江蘇南京210009)摘要梭甲基殼聚糖含量的測(cè)定通常采用的方法為乙酞丙酮法，但由于市售梭甲基殼聚糖樣品中氨基的的脫乙酞化程度和取代度差異，導(dǎo)致用乙酞丙酮法測(cè)定市售樣品含量時(shí)實(shí)測(cè)值與理論值偏差較大。因此，采用測(cè)還原總糖含量的3,5一二硝基水楊酸比色法(DNS法)對(duì)梭甲
2、基殼聚糖進(jìn)行含量測(cè)定。經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法線(xiàn)性的平均相關(guān)系數(shù)，=0.9995，以D-鹽酸氨基葡萄糖計(jì)線(xiàn)性范圍在200---1800jig，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD=1.23%，平均回收率為100.060o,RSD=2.45%0，顯色后吸收值在2h內(nèi)穩(wěn)定。用DNS法對(duì)市售梭甲基殼聚糖樣品的含量測(cè)定結(jié)果與理論含量基本相符。因此，該方法更適用于狡甲基殼聚糖的含量測(cè)定.關(guān)鍵詞梭甲基殼聚糖;含量測(cè)定;乙酞丙酮法;3,5一二硝基水楊酸(DNS)中圖分類(lèi)號(hào):0539文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1005-8915(2008)01-0059-05梭
3、甲基殼聚糖為殼聚糖的梭甲基化產(chǎn)物。殼量測(cè)定。聚糖是從蝦、蟹等甲殼類(lèi)海洋生物中提取出的甲殼本文采用乙酞丙酮法和DNS法對(duì)市售幾種梭素經(jīng)脫乙酞化得到，結(jié)構(gòu)為戶(hù)(1,4)-2一乙酞氨基-甲基殼聚糖進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)DNS法進(jìn)行方法學(xué)D-葡萄糖單元和戶(hù)(1,4)-2-氨基一D-葡萄糖單元共驗(yàn)證。聚物。由于天然甲殼素和殼聚糖具有剛性骨架和1材料與方法較強(qiáng)的分子間氫鍵，使其分子具有一種有序的晶型結(jié)構(gòu)，均不溶于水，使得應(yīng)用受到限制[[1,210梭甲1.1儀器與試劑基殼聚糖由于引人了梭甲基使其水溶性大大增強(qiáng)，儀器:島津(LIBRORAEU-
4、210)分析天平，島從而擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍，不僅在制藥、生物醫(yī)用材津UV-2401PC紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)，江蘇金壇料行業(yè)用途廣泛，在健康食品，化妝品等行業(yè)也有市儀器廠(chǎng)85-1微型漩渦混合儀。大量的研究和開(kāi)發(fā)報(bào)道[31。因此其含量測(cè)定方法試劑:梭甲基殼聚糖分別購(gòu)自仙居生物化學(xué)制的確定是十分重要的，以便進(jìn)行質(zhì)量控制。藥廠(chǎng)，青島海普生物技術(shù)有限公司，上海升耀生物技關(guān)于梭甲基殼聚糖的含量測(cè)定，目前國(guó)內(nèi)外報(bào)術(shù)有限公司，均為醫(yī)藥級(jí)。D-鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)道較少而且缺少專(zhuān)屬性測(cè)定該多糖含量的成熟方品購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為
5、法，并且由于沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品因此無(wú)法使用HPLCNMC20060621。乙酸丙酮，結(jié)晶酚(苯酚)購(gòu)自上海方法進(jìn)行定量分析，故多采用化學(xué)分析方法[[3]。凌峰化學(xué)試劑有限公司，均為分析純。3,5一二硝基目前測(cè)定多糖的方法有硫酸苯酚法、硫酸蔥酮水楊酸，亞硫酸氫鈉購(gòu)自南京化學(xué)試劑廠(chǎng)，均為分析法、乙酞丙酮法、硫酸咔哇法、DNS法等。其中硫純。NaOH購(gòu)自廣東汕頭市西隴化工廠(chǎng)，為分析純。酸苯酚法和硫酸蔥酮法適用于總糖含量的測(cè)定，硫酒石酸鉀鈉購(gòu)自上海光華化學(xué)試劑廠(chǎng)，為分析純。酸咔哇法適用于己糖醛酸，乙酞丙酮法適用于氨基其它試劑均來(lái)自于
6、南京化學(xué)試劑廠(chǎng)，均為分析純。糖，DNS法適用于還原糖的測(cè)定。由于組成梭甲1.2乙統(tǒng)丙酮法測(cè)定菠甲基殼聚糖中單糖含量基殼聚糖的主要單糖結(jié)構(gòu)為竣甲基氨基葡萄糖和1.2.1乙酸丙酮法原理氨基葡萄糖在堿性條件竣甲基乙酸氨基葡萄糖而且均為還原糖，因此從原下加熱，乙酞丙酮將氨基葡萄糖分子2號(hào)碳位上的理看乙酞丙酮法和DNS法較適合于此種多糖的含氨基乙酞化，生成帶有毗咯環(huán)的N-乙酞衍生物。該收稿日期:2007-09-10修回日期:2007-10-19作者簡(jiǎn)介:鄒巧根，1963年生，漢族，博士。，通訊作者:韋萍,1961年生，漢族，教授，
7、博導(dǎo)。Tel:025-83587341,E-mail:weiping@njut.edu.cn,萬(wàn)方數(shù)據(jù)藥物生物技術(shù)第巧卷第1期衍生物與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)，反應(yīng)物呈紅色，于10ml，即得樣品溶液。525rnn測(cè)定吸光度。其適用范圍是氨基糖。1.3.2.5顯色和測(cè)定川精密移取2ml樣品溶1.2.2測(cè)定方法[33精密稱(chēng)定梭甲基殼聚糖干燥液置10ml具塞試管中，加人lmlDNS試劑，混勻品30rng，置sml安瓶中，加sml6mol/L鹽酸，沸水浴中加熱顯色smin，流動(dòng)水冷卻，加水稀釋封口后沸水浴中水解2.sh，冷卻，完全轉(zhuǎn)
8、移至燒杯至10ml;以空白為參比，于520nm處測(cè)定吸收中，用6mol/LNa0H溶液調(diào)節(jié)至中性，定容至值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，通過(guò)回歸方程計(jì)算梭甲基殼聚looml，精密移取sml，加水稀釋至25ml，即得樣糖溶液的還原糖含量(以氨基葡萄糖計(jì))。品溶液，取樣品溶液3ml，加水稀釋至5ml，再加2結(jié)果乙酞丙酮溶液lml，加無(wú)
