二步聚合酶鏈反應檢測皮膚t細胞淋巴瘤的t細胞受體基因重排.docx

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1、二步聚合酶鏈反應檢測皮膚T細胞淋巴瘤的T細胞受體基因重排二步聚合酶鏈反應檢測皮膚T細胞淋巴瘤的T細胞受體基因重排中華皮膚科雜志1998年第4期第31卷論著作者：丁鐵鋼　邱丙森　JackLongley單位：美國耶魯大學醫(yī)學院皮膚科(丁鐵鋼，JackLongley)；上海醫(yī)科大學皮膚病學研究所皮膚病理研究室(邱丙森)關(guān)鍵詞：聚合酶鏈反應；T細胞受體；基因重排；皮膚T細胞淋巴瘤【摘要】　目的　應用二步聚合酶鏈反應(PCR)檢測皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)的T細胞受體(TCR)基因重排，提高其準確性和特異性，并應用已知重排的cDNA序列，推測該病患者的特異肽鏈順序，為免疫治療提供新線

2、索和途徑。方法　先用TCR基因重排區(qū)域以外的部分為引物，做10～30個循環(huán)擴增。取得一定數(shù)量的cDNA，作為模板，再經(jīng)30～40個循環(huán)擴增，獲得較純的cDNA。然后將此產(chǎn)物放入質(zhì)粒，進一步分析DNA序列。按照分析結(jié)果，制備出特異的分子探針，對二步PCR擴增產(chǎn)物進行分子雜交，推測出患者的特異性肽鏈順序。結(jié)果　以Vβ8為特殊引物所顯示的反應帶明顯，用Vβ8順序制成的分子探針雜交，示明顯的特異性結(jié)合。特異性分子探針只與CTCL患者的cDNA雜交，與對照組標本不發(fā)生交叉反應。結(jié)論　二步PCR可準確地檢測CTCL的TCR基因重排，其特異性強，并可在此基礎上應用已知重排的cDNA序列推測

3、該病患者的特異性肽鏈，為免疫治療提供新線索和途徑。TwoStepPolymeraseChainReactionDetectingtheT-CellReceptorGeneRearrangementinCutaneousT-CellLymphomaDingTiegang*,QiuBingsen,JackLongley.*DepartmentofDermatology,MedicalCollege,YaleUniversity,USA【Abstract】　Objective　Atwosteppolymerasechainreaction(PCR)strategywasusedto

4、amplifycopyDNAscorrespondingtothespecialregionoftheT-cellreceptor(TCR)β-chain.MethodsandResultsWiththistechnique,adominantTCRgenerearrangementthatusedtheβ8variableregiongenesegmentwasidentifiedinapatientwithcuteneousTcelllymphomaanditssequencedeterminedfrommultipleindependentlygeneratedsubc

5、lonalPCRproducts.AnoligonucleotidecorrespondingtothehighlyvariablejunctionalregionoftheclonallyexpandedTCRgenerearrangementwassynthesizedandusedforfurtherconfirmingstudies.Finally,fromthesequencedataobtained,apeptidecorrespondingtotheβ-chainjunctionalregionsequenceofthepatient′sclonallyexpa

6、ndedT-cellswasgenerated.ConclusionPreliminarystudiesusingthispeptideindicatethatitisantigenicandmaypotentiallybeusefulindevelopingapatient-specifictumourvaccine.KeyWords　PolymerasechainreactionT-cellreceptorGenerearrangementCutaneousT-celllymphoma網(wǎng)址：www.jxdyf.com第4頁，共4頁T細胞在發(fā)生腫瘤的過程中，像B細胞的免疫球

7、蛋白基因一樣，也發(fā)生T細胞受體(TCR)基因重排［1］。研究TCR基因重排，可提供對皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)的起因、發(fā)病機理、早期診斷、監(jiān)視病情和治療的認識與依據(jù)。隨著聚合酶鏈反應(PCR)技術(shù)的開展，為CTCL基因重排的研究開拓了新途徑，但因標本的來源，特別是自從福爾馬林固定、石蠟包埋的切片中提取的RNA或DNA的數(shù)量和質(zhì)量均極受限，若以這樣的標本進行PCR擴增，其產(chǎn)物難免不能出現(xiàn)較多、較重的背景反應，結(jié)果常難于分析。為此，我們應用二步PCR法檢測一例CTCL患者的TCR基因重排，獲得滿意的效果。