高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素論文

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1、高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素論文李學(xué)民曹彥忠張進(jìn)杰范春林劉曉茂錢小清【摘要】建立了用高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(LCMSMS)測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素殘留量的方法。蜂蜜樣品用磷酸鹽緩沖溶液溶解，經(jīng)OasisHLB固相萃取柱凈化。5種頭孢菌素在C18柱上以乙腈水為流動(dòng)相梯度洗脫條件下完成分離，電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜在正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行測(cè)定。添加濃度在2～100μg/kg范圍時(shí)，回收率為84.2%～103.6%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.89%～9.08%。本方法頭孢唑啉的定量限為10μg/kg，頭孢匹林、頭

2、孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟的定量限為2.0μg/kg。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜;頭孢菌素;蜂蜜1引言頭孢菌素是分子中含有頭孢烯和頭霉烯兩類β內(nèi)酰胺類的半合成抗生素，具有廣譜強(qiáng)殺菌、能耐酸、耐青霉素酶及過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率比青霉素低的特點(diǎn)，主要對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌具有殺菌作用1。隨著頭孢菌素化學(xué)研究的不斷深入，在動(dòng)物養(yǎng)殖及疾病治療中廣泛應(yīng)用.freelg,6mL)：使用前分別用5mL甲醇、10mL水和5mL磷酸鹽緩沖溶液預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)。頭孢唑啉(CAS：25953199)、頭孢匹林(CAS：24356

3、603)、頭孢氨芐(CAS：16549567)、頭孢洛寧(CAS：5575213)、頭孢喹肟(CAS：118443893)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由Sigma公司提供;甲醇、乙腈為色譜純;乙酸、NaOH、NaH2PO4為優(yōu)級(jí)純;磷酸鹽緩沖溶液(0.15mol/L，pH=8.5)。其它試劑為分析純。2.2液相色譜與質(zhì)譜條件液相色譜條件：流動(dòng)相A為水，含0.1%(V/V)甲酸;B為乙腈。梯度洗脫：0～2min,95%A;2～8min,40%A;8～15min,95%A。流速：200μL/min。色譜柱：ZORBAXSBC18(150

4、mm×2.1mm，3.5μm);進(jìn)樣量：20μL。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源(ESI);掃描方式：正離子掃描;檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);噴霧電壓(IS)：5500V;霧化氣(NEB)：0.055MPa，氣簾氣(CUR)：0.079MPa，輔助氣(AUIX)：6L/min;離子源溫度400℃。其它MRM條件見(jiàn)表1。表15種頭孢菌素的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓、碰撞氣能量1949分析化學(xué)第38卷第5期李學(xué)民等：高效液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中5種頭孢菌素2.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制準(zhǔn)確稱取每種頭孢菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別

5、用水配制成濃度為1.0g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。取適量頭孢菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用空白樣品提取液配制成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。2.4樣品處理稱取5g蜂蜜樣品于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸鹽緩沖溶液溶解樣品，混勻，用5moL/LNaOH溶液調(diào)節(jié)至pH=8.5。把樣品溶液移至下接OasisHLB固相萃取柱的貯液器中，以3mL/min的流速通過(guò)固相萃取柱，先用5mL磷酸鹽緩沖溶液洗滌三角瓶并過(guò)柱，再用2mL水洗柱，棄去全部流出液。用2mL乙腈洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，在40℃用氮?dú)獯蹈桑?mL水溶解殘?jiān)?搖勻后，過(guò)0.2

6、μm濾膜，供液相色譜電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。3結(jié)果與討論3.1提取溶液的選擇根據(jù)蜂蜜樣品的特點(diǎn)和被測(cè)物的性質(zhì)，確定磷酸鹽緩沖溶液作為提取液。通過(guò)回收率實(shí)驗(yàn)，比較了提取液中磷酸鹽緩沖溶液濃度和pH值對(duì)5種頭孢菌素回收率的影響。從圖1a和b可見(jiàn)，當(dāng)提取液中磷酸鹽緩沖溶液濃度為0.15mol/L，pH=8.5時(shí)，5種頭孢菌素回收率最佳。因此，本方法使用pH=8.5，0.15mol/L磷酸鹽緩沖溶液作為提取液。3.2固相萃取柱洗脫條件的選擇本方法比較了用1,2和3mL乙腈作為洗脫劑，對(duì)5種頭孢菌素回收率的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)洗脫

7、劑用量為2mL時(shí)，5種頭孢菌素的回收率為94.5%～98.7%;當(dāng)洗脫劑用量為3mL時(shí)，5種頭孢菌素回收率沒(méi)有明顯改善。因此，本方法選用2mL乙腈作為洗脫劑。表2固相萃取柱洗脫劑用量對(duì)回收率的影響3mLEluant頭孢唑啉Cefazolin92.798.797.6頭孢洛寧Cefalonium96.798.196.3頭孢匹林Cephapirin89.295.296.3頭孢喹肟Cefquinome95.896.995.4頭孢氨芐Cephalexin86.794.595.93.3液相色譜柱的選擇分別使用μBondapakC18(300m

8、m×4.0mm，10μm)色譜柱和ZORBAXSBC18(150mm×2.1mm，3.5μm)色譜柱對(duì)5種頭孢菌素的色譜行為進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這兩種色譜柱的靈敏度均能滿足要求。但μBondapakC18色譜柱流速為1.0mL/min時(shí)，5種頭