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《少棘蜈蚣活性蛋白提取及纖溶作用性質(zhì)研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、少棘蜈蚣活性蛋白提取及纖溶作用性質(zhì)研究論文劉兵，譚竹鈞，陳明軍，劉浩，陳雅雄【摘要】目的研究少棘蜈蚣活性蛋白的纖溶性及其性質(zhì)。方法通過硫酸銨分段鹽析、DEAE纖維素柱和SephadexG-75柱層析從少棘蜈蚣ScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch組織分離純化出纖溶性活性蛋白，纖維蛋白平板法測(cè)定其纖溶性，SDS-PAGE測(cè)定樣品純度和分子量，溫度、pH改變對(duì)少棘蜈蚣纖溶性蛋白活性的影響。結(jié)果分離純化到一種相對(duì)分子質(zhì)量約為48.3kD的纖溶性蛋白.freelg。結(jié)論少棘蜈蚣活性蛋白具有纖溶性，該成分在40℃下基本穩(wěn)定，最適溫度35℃，
2、最適pH8.0。【關(guān)鍵詞】少棘蜈蚣活性蛋白分離提取纖溶活性Abstract：ObjectiveTostudythefibrinolyticactivityoftheactiveproteinofScolopendrasulspinipesmulticans.MethedAnoveloffibrinolyticproteinmoniumsuplhatesub-precipitation,DEAE-celluloseandSephadexG-75columnchromatographyfromthetissueoftheScolopendrasubspinipesmu
3、tilansL.Koch.ResultTheproteinshooleculardodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresisanalysis.Itsspecificactivitytohydrolyzefibring.Theactivityofenzymeethanesulfonylfluoride(PMSF),butinotetraaceticacid(EDTA).CorclusionTheproteinisstableunder40℃,theoptimumtemperatureis35℃,andtheoptim
4、umpHis8.0.KeyutilansL.Koch;Activeprotein;Purification;Fibrinolyticactivity蜈蚣屬陸生節(jié)肢動(dòng)物，是我國傳統(tǒng)的中藥材之一。目前蜈蚣藥材主流商品為少棘蜈蚣，產(chǎn)量約占95％，少棘蜈蚣Scolopendrasubspinipesmutitans全蟲入藥，已有二千多年的使用歷史，有熄風(fēng)解痙、消腫解毒的功能，主治小兒驚風(fēng)、破傷風(fēng)、抽搐、口眼歪斜、淋巴結(jié)結(jié)核、腫毒瘡瘍等。對(duì)其活性蛋白研究有利于進(jìn)一步探索其藥用作用機(jī)理，纖溶活性研究為進(jìn)一步研究其溶栓和抗癌活性奠定基礎(chǔ)。1材料與儀器1.1藥材少棘蜈蚣Scolo
5、pendrasubspinipesmutilansL.Koch購自安徽滁州大豐養(yǎng)殖場，由譚竹鈞教授對(duì)其進(jìn)行種類鑒定，挑取活體于-80℃冰箱中凍存。1.2儀器自動(dòng)柱層儀(包括梯度混合器、橫流器、自動(dòng)部分收集器、紫外檢測(cè)儀、小型臺(tái)式記錄儀)，上海滬西分析儀器廠有限公司產(chǎn)品；pH計(jì)［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，其精度為±0.01pH］；高速冷凍離心機(jī)（KDC-160HR，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；真空冷凍干燥器（LABCONCO，美國）；HHS電熱恒溫水浴鍋（上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
6、）；DYY－Ⅲ穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀和DYY－Ⅲ28垂直夾芯電泳槽（北京六一儀器廠）。1.3試劑Sephadexg-75，臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品；DEAE-32，廣東省汕頭市西隴化工廠分裝；十二烷基硫酸鈉（SDS），天津市瑞金特化學(xué)品有限公司產(chǎn)品；丙烯酰胺，天津市大茂化學(xué)試劑廠產(chǎn)品；考馬斯亮藍(lán)R-250、G-250，北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；牛血清白蛋白（BSA），牛血纖維蛋白原sigma-F8630、凝血酶sigma-T4648，廣州寬林儀器科技有限公司產(chǎn)品；尿激酶，中國藥品生物制品檢定所提供。2方法2.1少棘蜈蚣粗提物的制備［1］取-80℃凍死的新鮮蜈蚣
7、16條，4℃冰箱中解凍后稱重46.72g，剪刀絞碎于研缽中研磨至糜狀，按SF對(duì)蜈蚣纖溶活性蛋白活力影響的實(shí)驗(yàn)表明，不同濃度EDTA對(duì)少棘蜈蚣纖溶蛋白影響不大，表明纖溶蛋白不屬于金屬酶類；而絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF則能完全抑制該蛋白的纖溶活性，表明少棘蜈蚣纖溶活性蛋白可能屬于絲氨酸類蛋白酶類［7］。市售纖維蛋白原內(nèi)常含有少量纖溶酶原，纖溶酶原可在纖溶激酶作用下變?yōu)槔w溶酶，纖溶酶作用于纖維蛋白后出現(xiàn)纖溶圈，為了探究少棘蜈蚣纖溶活性蛋白的作用機(jī)理，將制備好的纖維蛋白平板置80℃處理30min，使其中纖維蛋白溶酶原全部失活，制成去纖溶酶纖維蛋白平板，以未加熱纖維蛋白平板
8、做對(duì)照，對(duì)
