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《樹突狀細胞的體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫作用》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、樹突狀細胞的體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫作用作者:張建芳,于文彬,徐修禮,蘇明權(quán),馬越云,劉家云,丁振若【關(guān)鍵詞】樹突狀細胞 關(guān)鍵詞:樹突狀細胞;LAK細胞;免疫治療 摘要:目的建立體外培養(yǎng)擴增樹突狀細胞(DC)的方法,并觀察其誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫作用.方法分離外周血單個核細胞,應(yīng)用GM-CSF及IL-4誘導(dǎo)DC產(chǎn)生,用TNF-α和PGE2促進其成熟,并用肺癌細胞系GLC-82可溶性抗原致敏.將成熟DC與自體LAK細胞混合培養(yǎng)(DC-LAK),用MTT法檢測DC-LAK細胞及LAK細胞對多種腫瘤細胞系的殺傷作用.結(jié)果經(jīng)GM-CSF,IL-4,TNF-α,PGE2作用后,細胞表達CD1a
2、陽性率為71.0%,CD8350.0%,CD14陽性率低于10.0%,高表達HLA-Ⅰ,HLA-Ⅱ和CD45,為典型的DC表型特征.DC-LAK和LAK細胞對4種腫瘤細胞(GLC-82,A549,moser和MCF-7)的殺傷率,前者為84.7%,66.9%,49.3%和56.0%,后者為43.5%,31.3%,45.0%和32.4%.結(jié)論成功的誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)特征及增強LAK細胞殺傷活性的DC. Invitrogenerationofhumanblooddendriticcellsforactivetumorimmunotherapy Abstract:AIMToestabli
3、shamethodtoculturedendriticcells(DC)invitroandtoobservetheanti-tumoreffectin-ducedbyDC.METHODSDendriticcellsPBMCstimulatedorsolubleantigenabstractedfromlungcan-cercelllineGLC-82.TNF-αandPGE2ixedcellsedDC-LAK.CytotoxicityofDC-LAKandLAKeasuredbyMTTassay.RESULTSTheculturedDCexpressedHLA-Ⅰ,HLA-ⅡandC
4、D45andpositiveratesofCD1a,CD83andCD14oserandMCF-7)PBMCsuc-cessfully. 0引言 近年來樹突狀細胞(DC)可有效地遞呈可溶性腫瘤抗原,增強機體對腫瘤的特異性免疫應(yīng)答,并在臨床取得了成績[1,2].我們將外周血中貼壁的單個核細胞作為DC的前體細胞,聯(lián)合應(yīng)用一組細胞因子誘導(dǎo)獲得了純度較高的人樹突狀細胞,并將之與LAK細胞結(jié)合,體外誘導(dǎo)產(chǎn)生了相對高效而特異的抗腫瘤免疫作用. 1材料和方法 1.1材料 基因重組人IL-4,TNF-α和GM-CSF為Promega公司產(chǎn)品,PGE2購自Sigma公司,淋巴細胞分離液購自上海
5、醫(yī)學(xué)試劑廠,IL-2為本?;蜓芯克a(chǎn)品,抗CD1a-FITC和抗CD83-FITC購自晶美公司,HLA-Ⅰ,HLA-Ⅱ抗體及羊抗鼠-FITC購自北京邦定公司,酶聯(lián)免疫檢測儀為Labsystem產(chǎn)品;CD14/CD45雙色熒光標(biāo)記抗體由西京醫(yī)院免疫科提供.肺癌A549為本?;A(chǔ)部免疫學(xué)教研室提供;乳腺癌MCF-7細胞引自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;大腸癌moser細胞、肺癌GLC-82細胞為本室保留株.各細胞系均用含50mL・L-1小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,于37℃,50mL・L-1CO2條件下常規(guī)培養(yǎng). 1.2方法 1.2.1腫瘤可溶性抗原提取 收集腫瘤
6、細胞于低滲條件下反復(fù)凍融4次,以5000r・min-1離心30min,取上清,用考馬斯亮藍染料結(jié)合法測定蛋白質(zhì)含量,過濾后凍存?zhèn)溆? 1.2.2DC及LAK細胞的制備 以常規(guī)方法分離PBMC,然后用含100mL・L-1FCS的RPMI1640培養(yǎng)液懸浮,以每孔5×106個細胞加入6孔板,于37℃,50mL・L-1CO2條件下貼壁2h,用預(yù)熱的培養(yǎng)液輕輕洗出非貼壁細胞,調(diào)密度至1×109・L-1,加IL-2300kU・L-1,37℃,50mL・L-1CO2條件下培養(yǎng),每4d換液1次,為LAK細胞.貼壁
7、細胞加完全1640培養(yǎng)液,用100μg・L-1的GM-CSF及1000U・L-1的IL-4聯(lián)合刺激誘導(dǎo)DC分化.DC培養(yǎng)4d,加入GLC-82細胞可溶性抗原100μg・L-1,6d加TNF-α(1000kU・L-1),PGE2(10μmol・L-1).10d將DC與LAK細胞混合培養(yǎng)4h,稱為DC-LAK. 1.2.3細胞表型分析 收集培養(yǎng)7d的細胞,直接(抗CD14/抗