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《臨床醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文腫瘤抑制基因2真核表達載體的構(gòu)建及在卵巢癌細胞ho8910中的表達鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、腫瘤抑制基因DOC2真核表達載體的構(gòu)建及在卵巢癌細胞HO8910中的表達鑒定姓名：2014年6月25日腫瘤抑制基因DOC2真核表達載體的構(gòu)建及在卵巢癌細胞HO8910中的表達鑒定作者：劉淑娟，韓軍濤，辛?xí)匝?，吳元明，陳蘇民【摘要】0的構(gòu)建腫瘤抑制基因DOC2的真核表達載體pCDNA3.1p93,將其轉(zhuǎn)入人卵巢癌細胞系HO8910中，對其基因表達進行相關(guān)檢測，為進一步研究DOC2的功能奠定基礎(chǔ)。方法利用Xhol酶切含有p93cDNA的質(zhì)粒得到p93cDNA基因片段，將其連接入真核表達載體PCDNA3.1,并通過酶切鑒定。用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將真核表達載體pCD
2、NA3.1p93轉(zhuǎn)染HO8910，通過G418篩選穩(wěn)定表達克?。挥妹庖呓M化法觀察人DOC2蛋白在HO8910中的表達。結(jié)果構(gòu)建了DOC2的真核表達載體pCDNA3.1p93,并通過酶切鑒定。免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示pIRES2EGFPp93成功轉(zhuǎn)入HO8910中。結(jié)論成功構(gòu)建了真核表達載體pCDNA3.1p93并在HO8910屮得到穩(wěn)定表達，為研究DOC2蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】DOC2真核表達載體卵巢癌ConstructionofTheEukaryoticExpressionVectorpCDNA3.1p93andItsExpressioninO
3、varianCancerCellLineHO8910Abstract:ObjectiveToconstructanrecombinantvectorconsistedofpCDNA3.1withDOC2cDNA(p93)andtransfectitintohumanovariancancercelllineHO8910inordertoinvestigatethefunctionofDOC2geneonovariancancercell.MethodsTherecombinantvector(pCDNA3.1p93)wasconstructedbyXh
4、olanditscorrectionwasconfirmedbyrestrictionpattern.ThenpCDNA3.1p93wastransfectedintoHO8910byLipofectaminandthepositiveclone8910p93and8910pCDNA3.1wereselectedbyG418.Finally,theexpressionofDOC2in8910p93wasprovedbyimmuncytochemicalmethod.ResultsTherecombinantvectorpCDNA3.1p93wascon
5、structedsuccessfully.AfterbeingtransfectedintoHO8910,thepCDNA3.1p93positiveclonecouldbeharvestedbyG418andthesteadyexpressionofproteinDOC2wasconfirmedbyimmuncytochemicalmethod.ConclusionAftertherecombinantvectorpCDNA3.1p93beingconstructed,DOC2genecouldexpresssteadilyinHO8910.This
6、willallowustostudythefunctionofDOC2geneinfuture.Keywords:DOC2;Eukaryoticexpressionvector;Ovariancancer0引言卵巢癌是婦科腫瘤中最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病機制與抑癌基因的關(guān)系一直是該領(lǐng)域研究的熱點［1］。1994年Mok等［2］在研究人正常卵巢上皮細胞與卵巢癌細胞的基因差異表達時，發(fā)現(xiàn)該基因在正常卵巢上皮細胞中有表達，而在卵巢癌細胞系及組織中無喪達，故將其命名為DOC2(Differentiallyexpressedinovariancancer2)。人類
7、DOC2位于染色體5pl3,長約35kb,含有15個外顯子和14個內(nèi)含子，cDNA共3268bp,編碼長度為770個氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量約為82.5KDa［3］。DOC2是具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的新的磷蛋白，它能抑制多種腫瘤細胞的生長，被認為是一種可能的腫瘤抑制基因，但其作用機制尚未完全闡明。本研宂中，我們構(gòu)建了含有DOC2cDNA(p93)的真核表達載體，并轉(zhuǎn)染人卵巢癌細胞系HO8910,為研宄DCO2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展屮的作用奠定了基礎(chǔ)。1材料和方法1.1材料質(zhì)粒pCDNA3.1(-)由本校生化教研室陳蘇民教授惠贈；含有人DOC2cDNA的質(zhì)粒p93由美
8、國Dr.XuXiangxi惠贈；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑盒(Lipofectamine2000)購自GIB
