梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白比較研究

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1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白比較研究作者：唐任能，趙雨，孫曉迪，曲曉波【摘要】目的：比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨水溶性總蛋白差異。方法：采用SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳和BCATM蛋白含量測(cè)定法比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨水溶性總蛋白差異。結(jié)果：鹿茸水溶性總蛋白、鹿托盤水溶性總蛋白和鹿骨水溶性總蛋白的相對(duì)含量及組成差異極其明顯，SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳法及BCATM蛋白含量測(cè)定法是鑒別鹿茸、鹿托盤及鹿骨有效方法。結(jié)論：本研究對(duì)鑒別鹿茸、鹿托盤、鹿骨粉具有一定

2、的意義?！娟P(guān)鍵詞】鹿茸;鹿托盤;鹿骨;水溶性總蛋白質(zhì)1材料儀器材料梅花鹿茸、鹿托盤和鹿骨均由吉林東豐藥業(yè)提供。低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，購于中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所；BCATM(二辛可寧酸或二羧基喹啉)蛋白濃度試劑盒，購于美國Pierce公司；其他試劑均為分析純。儀器HetoLL3000型凍干機(jī)，瑞典JounaNordic公司；電泳儀，北京六一儀器廠；垂直板電泳槽，北京六一儀器廠；高速離心機(jī)，Eppendorf公司。實(shí)驗(yàn)方法.1總蛋白的提取課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國民經(jīng)濟(jì)具有一

3、定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果取等量干品鹿茸、鹿托盤和鹿骨用車床機(jī)粉粹成細(xì)粉(120目)即可。分別取鹿茸粉,鹿托盤粉，鹿骨粉100g，用20mMTrisHCl(含molNaCl、1mmolEDTA、1mmolPMSF)緩沖液浸提(4℃×2h),離心(10020rpm×min),即得上清;沉淀用上述緩沖液反復(fù)浸提3次,離心(1000rpm×min),合并上清,用80%硫酸銨沉淀,靜置(4℃×2h),離心(1000rpm×min)，將沉淀用蒸餾水透析，凍干即得鹿茸水溶性總蛋白，鹿托盤水溶性總蛋白和鹿骨水溶性總蛋白粗品。.2

4、蛋白含量測(cè)定使用PIERCE公司生產(chǎn)的BCATM蛋白試劑盒測(cè)定濃度。.3SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳按文獻(xiàn)方法［2］，采用溶度為10%的分離膠和溶度為5%的溶縮膠,溶縮膠電壓為70mV，分離膠電壓為140mV。采用考馬斯亮藍(lán)R250進(jìn)行染色,最后用脫色液(甲醇∶冰醋酸∶蒸餾水=∶∶1)脫色,至背景清楚，觀測(cè)分子量范圍。結(jié)果.1梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白含量測(cè)定各取100g梅花鹿鹿茸粉、鹿托盤粉及鹿骨粉得到水溶性蛋白粗品分別為、g、g,使用PIERCE公司生產(chǎn)的BCATM蛋白試劑盒測(cè)定濃度,粗品蛋白中蛋白含量分別為93%、88%、73%。.2SDSPAGE電泳課題份量和難易程

5、度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果可見鹿茸水溶性總蛋白明顯可見有8條帶,其分子量大約分別為110KD、100KD、66KD、51KD、43KD、35KD、30KD、14KD。從帶上看，含量最高的是分子量為66KD的蛋白;其次分子量為14KD的蛋白。鹿托盤水溶性總蛋白明顯可見有11條帶,其分子量大約分別為110KD、100KD、66KD、51KD、4KD、30KD、23KD、17KD、16KD、

6、14KD,10KD。從帶上看,含量最高的是分子量為66KD的蛋白;其次分子量為51KD的蛋白。鹿骨水溶性總蛋白幾乎無明顯可見的蛋白帶(見表1)。討論目前，對(duì)鹿茸、鹿托盤、鹿骨臨床療效物質(zhì)作用基礎(chǔ)研究較少，特別是對(duì)于鹿茸、鹿托盤、鹿骨中大分子進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床應(yīng)用提供表1鹿茸、鹿托盤和鹿骨的蛋白譜帶分布相對(duì)分子量10KD14K16KD17KD23KD30KD35KD43KD51KD66KD100KD110KD鹿茸MWWWWSWW鹿托盤WWWWWWWMSWW鹿骨[11]W注：S:strong;M:medium;W:weak。蛋白質(zhì)研究幾乎沒有文獻(xiàn)課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出

7、結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果報(bào)道。蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，每一種蛋白質(zhì)都有特定的生物學(xué)功能［3］。經(jīng)SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨蛋白差異發(fā)現(xiàn)：鹿骨里幾乎無明顯可見的蛋白譜帶，鹿托盤具有與鹿茸相同的７條蛋白帶，其分子量分別約為110KD，100KD，66KD