梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白比較研究

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1、從本學科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白比較研究作者：唐任能，趙雨，孫曉迪，曲曉波【摘要】目的：比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨水溶性總蛋白差異。方法：采用SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳和BCATM蛋白含量測定法比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨水溶性總蛋白差異。結(jié)果：鹿茸水溶性總蛋白、鹿托盤水溶性總蛋白和鹿骨水溶性總蛋白的相對含量及組成差異極其明顯，SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳法及BCATM蛋白含量測定法是鑒別鹿茸、鹿托盤及鹿骨有效方法。結(jié)論：本研究對鑒別鹿茸、鹿托盤、鹿骨粉具有一定

2、的意義?！娟P(guān)鍵詞】鹿茸;鹿托盤;鹿骨;水溶性總蛋白質(zhì)1材料儀器材料梅花鹿茸、鹿托盤和鹿骨均由吉林東豐藥業(yè)提供。低分子量標準蛋白質(zhì)，購于中國科學院上海生物化學研究所；BCATM(二辛可寧酸或二羧基喹啉)蛋白濃度試劑盒，購于美國Pierce公司；其他試劑均為分析純。儀器HetoLL3000型凍干機，瑞典JounaNordic公司；電泳儀，北京六一儀器廠；垂直板電泳槽，北京六一儀器廠；高速離心機，Eppendorf公司。實驗方法.1總蛋白的提取課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙嫛谋緦W科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一

3、定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果取等量干品鹿茸、鹿托盤和鹿骨用車床機粉粹成細粉(120目)即可。分別取鹿茸粉,鹿托盤粉，鹿骨粉100g，用20mMTrisHCl(含molNaCl、1mmolEDTA、1mmolPMSF)緩沖液浸提(4℃×2h),離心(10020rpm×min),即得上清;沉淀用上述緩沖液反復(fù)浸提3次,離心(1000rpm×min),合并上清,用80%硫酸銨沉淀,靜置(4℃×2h),離心(1000rpm×min)，將沉淀用蒸餾水透析，凍干即得鹿茸水溶性總蛋白，鹿托盤水溶性總蛋白和鹿骨水溶性總蛋白粗品。.2

4、蛋白含量測定使用PIERCE公司生產(chǎn)的BCATM蛋白試劑盒測定濃度。.3SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳按文獻方法［2］，采用溶度為10%的分離膠和溶度為5%的溶縮膠,溶縮膠電壓為70mV，分離膠電壓為140mV。采用考馬斯亮藍R250進行染色,最后用脫色液(甲醇∶冰醋酸∶蒸餾水=∶∶1)脫色,至背景清楚，觀測分子量范圍。結(jié)果.1梅花鹿鹿茸、鹿托盤及鹿骨水溶性總蛋白含量測定各取100g梅花鹿鹿茸粉、鹿托盤粉及鹿骨粉得到水溶性蛋白粗品分別為、g、g,使用PIERCE公司生產(chǎn)的BCATM蛋白試劑盒測定濃度,粗品蛋白中蛋白含量分別為93%、88%、73%。.2SDSPAGE電泳課題份量和難易程

5、度要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果可見鹿茸水溶性總蛋白明顯可見有8條帶,其分子量大約分別為110KD、100KD、66KD、51KD、43KD、35KD、30KD、14KD。從帶上看，含量最高的是分子量為66KD的蛋白;其次分子量為14KD的蛋白。鹿托盤水溶性總蛋白明顯可見有11條帶,其分子量大約分別為110KD、100KD、66KD、51KD、4KD、30KD、23KD、17KD、16KD、

6、14KD,10KD。從帶上看,含量最高的是分子量為66KD的蛋白;其次分子量為51KD的蛋白。鹿骨水溶性總蛋白幾乎無明顯可見的蛋白帶(見表1)。討論目前，對鹿茸、鹿托盤、鹿骨臨床療效物質(zhì)作用基礎(chǔ)研究較少，特別是對于鹿茸、鹿托盤、鹿骨中大分子進行評價，為臨床應(yīng)用提供表1鹿茸、鹿托盤和鹿骨的蛋白譜帶分布相對分子量10KD14K16KD17KD23KD30KD35KD43KD51KD66KD100KD110KD鹿茸MWWWWSWW鹿托盤WWWWWWWMSWW鹿骨[11]W注：S:strong;M:medium;W:weak。蛋白質(zhì)研究幾乎沒有文獻課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出

7、結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果報道。蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，每一種蛋白質(zhì)都有特定的生物學功能［3］。經(jīng)SDS聚丙烯酰銨凝膠電泳比較鹿茸、鹿托盤、鹿骨蛋白差異發(fā)現(xiàn)：鹿骨里幾乎無明顯可見的蛋白譜帶，鹿托盤具有與鹿茸相同的７條蛋白帶，其分子量分別約為110KD，100KD，66KD