豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗(yàn)

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1、豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗(yàn)Isolationandidentificationofporcinecircovirustype2andchallengeofcommercialpigswithPCV2研究生：丁婷婷專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師：高崧教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2012年5月J‘婷婷：豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人．I：感染試驗(yàn)豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗(yàn)摘要煳辮豬圓環(huán)病毒2型(porcinecircovimstype2)與豬群中發(fā)生的多種疾病相關(guān)，它可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎與腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸道疾病綜合征(P

2、RDC)、豬先天性振顫等疾病。PCV2病毒在國(guó)內(nèi)外廣泛流行，該病毒能降低豬體免疫力，常引起其他病原微生物的繼發(fā)或并發(fā)感染。豬圓環(huán)病毒病給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。我國(guó)自從2000年郎洪武首次報(bào)道檢測(cè)出PCV抗原以來，浙江、北京、四J11、黑龍江等省也報(bào)道有PCV2的感染。斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)是由豬圓環(huán)病毒2型引起的一種嚴(yán)重威脅斷奶仔豬健康的疾病。該病的主要臨床癥狀是呼吸困難、消瘦、腹瀉、皮膚蒼白、淋巴結(jié)腫大和黃疽。豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是近幾年

3、豬群中最重要的病原之一，在豬群中的感染率越來越高。本研究旨在監(jiān)測(cè)目前國(guó)內(nèi)大型豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型的流行情況，為豬圓環(huán)病毒病的防治提供有益參考。同時(shí)，本文通過商品豬單獨(dú)感染豬圓環(huán)病毒2型，同時(shí)應(yīng)用鑰匙孔血藍(lán)蛋白進(jìn)行免疫刺激復(fù)制PMWS，研究免疫刺激對(duì)PMWS的發(fā)生的影響，為PCV2致病機(jī)理的研究和豬圓環(huán)病毒疫苗的研制提供動(dòng)物模型。1豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定通過PCR檢測(cè)方法對(duì)揚(yáng)州市規(guī)?；涝讏?chǎng)采集的組織樣品進(jìn)行PCV2核酸DNA檢測(cè)，并對(duì)PCR檢測(cè)陽性的病料進(jìn)行PCV2的病毒分離，對(duì)分離到的5個(gè)PCV2毒株進(jìn)行序列測(cè)定和分析。序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，分離到的5個(gè)PCV2分離株中4

4、個(gè)為PCV2group1基因型，1株為PCV2group2基因型。5個(gè)分離株之問的遺傳距離比較近，其核苷酸同源性為95．0～99．4％。其中分離株50屬PCV2group1B亞型，5847、39、L4屬PCV2grouplC，且與荷蘭1C亞型相比，3個(gè)分離株與中國(guó)的1C亞型親緣關(guān)系較近。SD2分離株與4個(gè)2E毒株的同源性為96．8％～99％，同時(shí)SD2與2D亞型同處于一個(gè)大的分支，親緣關(guān)系也較近。流行病學(xué)調(diào)查說明，PCV2groupl和PCV2group2兩種基因型已在我國(guó)均存在，并且PCV2的流行毒株主要以PCV2b基因型為主。這為研究PCV2的遺傳和變異，探索PCV

5、2的遺傳進(jìn)化等提供了材料。2人工感染試驗(yàn)揚(yáng)州人學(xué)碩+學(xué)位論文12頭5周齡的母源抗體效價(jià)1：10以下的商品豬隨機(jī)分為4組，每組3頭，攻毒，分別為對(duì)照組(Contr01)、單獨(dú)佐劑試驗(yàn)組(KLH)、PCV2攻毒組(PCV2)、PCV2攻毒后佐劑刺激組(PCV2+KLH)，攻毒后KLH組和PCV2+KLH組每頭豬肌肉多點(diǎn)注射2mg用弗氏不完全佐劑乳化的鑰匙孔血藍(lán)蛋白(KLHl和腹腔注射10mL毓基乙酸培養(yǎng)基，攻毒后35天撲殺。試驗(yàn)結(jié)果表明，在攻毒后7天，PCV2攻毒組的試驗(yàn)豬都表現(xiàn)出血清學(xué)陽性轉(zhuǎn)化。在攻毒后35天剖檢，PCV2+KLH攻毒豬的淋巴結(jié)和肺臟的大體和顯微病變都比P

6、CV2攻毒組豬嚴(yán)重。通過熒光定量PCR檢測(cè)，PCV2+KLH組多數(shù)豬血清、肺和腹股溝淺淋巴結(jié)中PCV2病毒載量顯著高于PCV2組。PCV2+KLH組的組織病理學(xué)損傷比PCV2組嚴(yán)重，肉芽腫性炎癥反應(yīng)和淋巴細(xì)胞減少的程度比PCV2組嚴(yán)重，且與PCV2組相比，PCV2+KLH組試驗(yàn)豬肺臟與淋巴結(jié)中分布的PCV2抗原多。因此，免疫刺激對(duì)商品豬PMWS的發(fā)生起到了重要的作用。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型；病毒的分離與鑒定；人工感染；熒光定量PCRJ‘婷婷：豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人【：感染試驗(yàn)Isolationandidentificationofporcinecircoviru

7、stype2andchallengeofcommercialpigswithPCV2AbstractPorcinecircovirustype2(PCV2)istheprimarycausativeagentofassociateddiseases，theymainlyincludepostweaingmultisystemicwastingsyndrome(PMWS)，porcinedermatitisandnephropathysyndrome(PDNS)，porcinerespiratorydiseasecomplex(PRDC)a