豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗

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1、豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗Isolationandidentificationofporcinecircovirustype2andchallengeofcommercialpigswithPCV2研究生：丁婷婷專業(yè)：預防獸醫(yī)學導師：高崧教授揚州大學獸醫(yī)學院2012年5月J‘婷婷：豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人．I：感染試驗豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人工感染試驗摘要煳辮豬圓環(huán)病毒2型(porcinecircovimstype2)與豬群中發(fā)生的多種疾病相關，它可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎與腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸道疾病綜合征(P

2、RDC)、豬先天性振顫等疾病。PCV2病毒在國內(nèi)外廣泛流行，該病毒能降低豬體免疫力，常引起其他病原微生物的繼發(fā)或并發(fā)感染。豬圓環(huán)病毒病給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。我國自從2000年郎洪武首次報道檢測出PCV抗原以來，浙江、北京、四J11、黑龍江等省也報道有PCV2的感染。斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)是由豬圓環(huán)病毒2型引起的一種嚴重威脅斷奶仔豬健康的疾病。該病的主要臨床癥狀是呼吸困難、消瘦、腹瀉、皮膚蒼白、淋巴結腫大和黃疽。豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是近幾年

3、豬群中最重要的病原之一，在豬群中的感染率越來越高。本研究旨在監(jiān)測目前國內(nèi)大型豬場豬圓環(huán)病毒2型的流行情況，為豬圓環(huán)病毒病的防治提供有益參考。同時，本文通過商品豬單獨感染豬圓環(huán)病毒2型，同時應用鑰匙孔血藍蛋白進行免疫刺激復制PMWS，研究免疫刺激對PMWS的發(fā)生的影響，為PCV2致病機理的研究和豬圓環(huán)病毒疫苗的研制提供動物模型。1豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定通過PCR檢測方法對揚州市規(guī)模化屠宰場采集的組織樣品進行PCV2核酸DNA檢測，并對PCR檢測陽性的病料進行PCV2的病毒分離，對分離到的5個PCV2毒株進行序列測定和分析。序列比對分析發(fā)現(xiàn)，分離到的5個PCV2分離株中4

4、個為PCV2group1基因型，1株為PCV2group2基因型。5個分離株之問的遺傳距離比較近，其核苷酸同源性為95．0～99．4％。其中分離株50屬PCV2group1B亞型，5847、39、L4屬PCV2grouplC，且與荷蘭1C亞型相比，3個分離株與中國的1C亞型親緣關系較近。SD2分離株與4個2E毒株的同源性為96．8％～99％，同時SD2與2D亞型同處于一個大的分支，親緣關系也較近。流行病學調(diào)查說明，PCV2groupl和PCV2group2兩種基因型已在我國均存在，并且PCV2的流行毒株主要以PCV2b基因型為主。這為研究PCV2的遺傳和變異，探索PCV

5、2的遺傳進化等提供了材料。2人工感染試驗揚州人學碩+學位論文12頭5周齡的母源抗體效價1：10以下的商品豬隨機分為4組，每組3頭，攻毒，分別為對照組(Contr01)、單獨佐劑試驗組(KLH)、PCV2攻毒組(PCV2)、PCV2攻毒后佐劑刺激組(PCV2+KLH)，攻毒后KLH組和PCV2+KLH組每頭豬肌肉多點注射2mg用弗氏不完全佐劑乳化的鑰匙孔血藍蛋白(KLHl和腹腔注射10mL毓基乙酸培養(yǎng)基，攻毒后35天撲殺。試驗結果表明，在攻毒后7天，PCV2攻毒組的試驗豬都表現(xiàn)出血清學陽性轉(zhuǎn)化。在攻毒后35天剖檢，PCV2+KLH攻毒豬的淋巴結和肺臟的大體和顯微病變都比P

6、CV2攻毒組豬嚴重。通過熒光定量PCR檢測，PCV2+KLH組多數(shù)豬血清、肺和腹股溝淺淋巴結中PCV2病毒載量顯著高于PCV2組。PCV2+KLH組的組織病理學損傷比PCV2組嚴重，肉芽腫性炎癥反應和淋巴細胞減少的程度比PCV2組嚴重，且與PCV2組相比，PCV2+KLH組試驗豬肺臟與淋巴結中分布的PCV2抗原多。因此，免疫刺激對商品豬PMWS的發(fā)生起到了重要的作用。關鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型；病毒的分離與鑒定；人工感染；熒光定量PCRJ‘婷婷：豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定及其人【：感染試驗Isolationandidentificationofporcinecircoviru

7、stype2andchallengeofcommercialpigswithPCV2AbstractPorcinecircovirustype2(PCV2)istheprimarycausativeagentofassociateddiseases，theymainlyincludepostweaingmultisystemicwastingsyndrome(PMWS)，porcinedermatitisandnephropathysyndrome(PDNS)，porcinerespiratorydiseasecomplex(PRDC)a