離體篩選小麥抗赤霉病和根腐病突變體* i.小麥兼抗赤霉病和根腐病愈傷組織的篩選及其抗病性的鑒

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1、jftf}HEREDITAS(憋jing)14.(3):.4-6.二.=1.,絲2離體篩選小麥抗赤霉病和根腐病突變體*I.小麥兼抗赤霉病和根腐病愈傷組織的篩選及其抗病性的鑒定郭麗娟姚慶筱胡啟德(中國科學院遺傳研究所,北京,100101張浩康紹蘭鄧福友董金皋黃梧芳(河北農業(yè)大學,保定,071001)本文選用冬小麥和春小麥品種及其雜種后代的幼穗進行離體培養(yǎng),以赤霉病菌及根腐病菌的培養(yǎng)濾液為選擇劑,按不同的篩選方法篩選兼抗赤霉病和根腐病的突變體,用赤霉病菌和根腐病菌分生抱子直接接種在經篩選的愈傷組織上,進行抗病性鑒定。試驗結果表明:不同篩選方法對篩選兼坑赤霉病和根腐病的愈傷組織的效果有明顯差異,二

2、步篩選法比混合篩選法效果好。供鑒定的120塊愈傷組織中,有村塊愈傷組織具有兼抗赤霉病菌和根腐菌侵染的能力。關銳詞:小麥赤霉病菌,小麥根腐病菌,離體篩選赤霉?。‵usariumgraminearum)和根腐病(Helmiuthosporiumsativum)分別是我國材料和方法小麥南方和北方產麥區(qū)的兩大重要病害。近年(一)試驗材料來,赤霉病有向北方、而根腐病有向南方蔓延的選用6個冬小麥和春小麥品種和雜種后代趨勢,危害面積不斷擴大,因此,培育兼抗赤霉的幼穗作外植體進行離體培養(yǎng),幼穗長度為和根腐兩種病害,又具有優(yōu)良農藝性狀的過硬0.5-1.Ocm,品種和抗源已成為目前育種家們迫切關注的問(二)培養(yǎng)

3、荃題。誘導愈傷組織的培養(yǎng)基用MS培養(yǎng)基附加自從Carlson(1973)首次采用離體選擇2,4-D2mg/Lo繼代培養(yǎng)基用MS培養(yǎng)基附加技術篩選出煙草抗野火病的再生植株以來,國2,4-D2mg/L、激動素0.5mg/L。選擇培養(yǎng)基內外許多學者相繼在馬鈴薯E91、玉米t}l首用MS培養(yǎng)基分別附加:(1)根腐病菌培養(yǎng)濾蓓[7,a1、r小麥167燕麥〔10,117和水稻CQ等作物上獲得液3.0g/L;(2)赤霉病菌培養(yǎng)濾液0.5g/L;(3)成功,但在同廠作物中篩選出同時兼抗兩種病害的突變體,迄今尚未見報道。本文報道中國GuoLi護manetal.:InvitroScreeningofMutant

4、sResistanttoFusariumgraminearumandHelms-科學院遺傳研究所和河北農業(yè)大學自1989年nthosportumsativuminWheat1.SelectionofCallusResistanttoFusariumgramznearumand以來,應用組織培養(yǎng)和病菌培養(yǎng)濾液篩選技術,HelminthosporiumsativurnandDiseaseResista-并通過赤霉病菌和根腐病菌分生抱子直接接種nceAssayinWheat的抗病性鑒定,現(xiàn)已成功地獲得兼抗赤霉病和*本項研究得到國家自然科學基金的資助。參加本項工作的還有趙四維同志。根腐病的愈傷組織。

5、本文于1990年11月22日收到.4根腐病菌培養(yǎng)濾液1.獨/L與赤霉病菌培養(yǎng)濾衰1小麥赤.菌株和根腐曹株培養(yǎng)派液毒力的測試結果液0.25g/L的混合培養(yǎng)基(生物測定表明,根腐赤霉29號菌株根腐002號菌株病菌培養(yǎng)濾液1.5g/L的毒力相當于赤霉病菌培養(yǎng)濾液0.25g/L的毒力)。培養(yǎng)濾液種子根長相對抑制培養(yǎng)濾液!種子根長相對抑制柿釋怡ga(cm)根長柿釋1I數(shù)(cm)根長(三)病菌培養(yǎng)濾液的制備(cm)(cm)CK2.80CK3.53分別從小麥赤霉病和根腐病嚴重發(fā)病地區(qū)6000.422.382001.731。80*收集的40個菌株中,用生物測驗法,選出了產8000.662.144002.45

6、1.08生毒力強而穩(wěn)定的赤霉病菌”號菌株和根腐10000.762.048003.110.4212000.84病菌002號菌株,作為供試菌株,將赤霉病菌291.96*1號菌株的菌體放在PDA培養(yǎng)基上,在250C培*表示兩種菌株培養(yǎng)濾液毒力相當。養(yǎng)7天后切菌絲塊接種在PS培養(yǎng)基中,在250C將前述所選出的菌株用液體培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)21天后,經過過濾、消毒和濃縮制成赤霉制備出培養(yǎng)濾液,然后對制出的兩種培養(yǎng)濾液病菌培養(yǎng)濾液。將002號菌株的菌體放在改良用種子萌發(fā)方法測試毒力,以確定兩個TITl株培Fries加麥汁的液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)15天養(yǎng)濾液毒力相當?shù)呐浔?,測試結果見表1。后,經過消毒和濃縮制成

7、根腐病菌的培養(yǎng)濾液。(二)不同篩選方法對篩選小麥兼抗赤霉(四)篩選方法病和根腐病愈傷組織誘導頻率的影響1.二步篩選法將小麥幼穗先接種在含將冬小麥和春小麥品種及其雜種的幼穗分3.0g/L根腐病菌培養(yǎng)濾液的培養(yǎng)基上,待長出別接種在不同的選擇培養(yǎng)基上誘導愈傷組織,愈傷組織后,再轉到含0.5g/L赤霉病菌培養(yǎng)濾10天后觀察到在不含病菌的培養(yǎng)濾液的對照液的培養(yǎng)基上,或將幼穗先接種在含0.5g/L赤培養(yǎng)基上,愈傷組織呈白

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