小麥幼胚愈傷組織培養(yǎng)和抗赤霉病體細胞篩選

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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報IO(1)t9—15，l11ournalofHuazhon#Ayricul~ralUniversity小麥幼胚愈傷組織培養(yǎng)和抗赤霉病體細胞篩選。曹清波余毓君(華中農(nóng)業(yè)太學(xué)枉學(xué)系，武漢430070)摘要采用幼胚愈傷組織培養(yǎng)技術(shù)，觀察了親本和雜種后代及赤霉病粗毒素處理與否的愈傷組織筮育過程．結(jié)果表明：(1)不同基因型在出愈率．出愈勢、愈傷塊大小及方差壘能性愈傷組織的比率．褐變率．淘汰率．分化率上均有差異．F．表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢，或優(yōu)于【譬親值，或超出雙親平均值．(2)赤霉索粗毒素處理后，愈傷塊受抑制．褐

2、變增加，出苗率降低．在脫離毒素境后的恢復(fù)力和再生能力上，F(xiàn)l優(yōu)子親本．有較強的耐毒能力。(3)選用雜種廈改良品種作誘變材料可以提供較大的細胞水平上的選擇性．關(guān)鍵詞小麥：赤霉?。挥着哂鷤囵B(yǎng)；全能性愈傷：體細咆篩選中圈法分類號：$336：$435．121．45組織培養(yǎng)的細胞選擇應(yīng)用于怍物改良依賴于該作物的無性繁殖體系的建立。Shimada(1969)r”首次從小麥幼胚中誘導(dǎo)出愈傷及再生植株。從此，有關(guān)小麥組織培養(yǎng)再生檀株的研究越來越多．利用體細胞無性系變異改變抗性時，既可以進行細胞水平的誘變，又可以進行細胞水平篩

3、選．還能把細胞篩選與再生植株早期抗性鑒定相結(jié)臺以提高工效。小麥幼胚培養(yǎng)操作衙單，分化率高，實驗室操作能很好與大田季節(jié)相配套因而能廣泛用于體細胞無性系的研究和育種。小麥赤霉病是長江流域最主要病害，危害甚大．目前無免疲品種．已有的抗源只是抗性程度上的差異。因而尋找新的抗源、提高豐產(chǎn)品種的抗性就成為生產(chǎn)上追切需要解決的問題．組織培養(yǎng)技術(shù)及體外篩選無性系變異為抗源開拓提供了可能。本試驗對小麥幼胚愈傷組織的生長發(fā)育、早期判斷全能性愈傷和體細胞抗性篩選效應(yīng)進行研究．以期有益于小麥抗赤霉病遺傳育種工作。奉吏1990--08-

4、2敢副‘夸生卻袁o2—02乖題首助嘎目10華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報io善1材料與方法1．1供試材料豐產(chǎn)感病品種鄂恩一號(P)抗病品種溫州紅和尚(P)和望水白(P)及其雜種PIxP2、PxPs。取親本及雜交當(dāng)代l4天胚齡的幼胚，70％酒精處理30,-,,-60秒，0．1％升汞消毒15分鐘，無菌水沖洗3次，切下幼胚接種．1．2培養(yǎng)條件誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)基：每升內(nèi)含2MS大量元素、1MS微量元素、300mE谷氨酰氨、150mg天門冬酰氨、100rag肌醇、10rag維生索BL、lmg維生索B5、ling煙酸、2mg甘氨酸、1mg

5、2，4一D、0．1ragKT2％蔗糖。分化培養(yǎng)基：每升內(nèi)含MS無機鹽100rag肌醇、1000rag水解酪蛋白0．4rag2，4一D0．1ragKT、3％蔗糖。生根培養(yǎng)基：每升內(nèi)臺音MS大量元素1MS微量元素、1．5％蔗糖．以上培養(yǎng)基均用0．7％的瓊脂固化，pH5．8"-,6．0，高壓滅菌。每月繼代一次，4次繼代后轉(zhuǎn)八分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為25±2℃自然散光，分化時用日光燈照明。1．j曩毒囊舶制魯濃縮與處理：將從鄂麥g號麥穗上分離的禾谷鐮刀菌武昌菌株的菌絲，置八1MS無機鹽添加5啊蔗糖的液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)1

6、2天，濾除菌絲，加熱濃縮1／4，高壓滅菌后保存．粗毒索處理愈傷組織兩次，于第2敬和第3敬繼代前一周加毒液于試管內(nèi)，浸至愈傷塊高度的一半處，粗毒索的濃度第1次按l：3加無菌水稀釋液濃縮至原濃度，第2次按1：1稀釋按照Ozlas—AI【ins(1982)的際準(zhǔn)，將能出茁的愈傷稱為全能性愈傷．1．4童傷塊舶整體染色FlAA(I)固定24d,時，7O％酒精保存，經(jīng)5O嚦酒精后，用愛氏蘇術(shù)精染色，經(jīng)3O％、5O嚦到7O嘶酒精保存。，2結(jié)果與分析2．1童仿組級柏囂導(dǎo)不同基因型出愈率相差甚大(表1)．F偏高親或超高親．溫州紅

7、和尚的強出愈勢是值得注意的特點，雜種早期出愈快與基因型雜臺性有關(guān)．2．2童仿組皺舶生長最初為圓形的愈傷，當(dāng)增睦到4—511111時，愈傷組織表面局部細胞突起形成新愈傷，新生愈傷在幾個部位同時發(fā)生，其表面仍按增長——局部突起的方式繼續(xù)長大，當(dāng)長到一定大小繼代時，可按愈傷塊的自然狀態(tài)分離，保持其內(nèi)部結(jié)構(gòu)的完整性，按原來放置方向使其繼續(xù)生}乏。停止生氏的棗傷表現(xiàn)褐變井有一定程度的收縮出現(xiàn)了繼代過程中的大小分1七，，l朔曹清波等：小麥幼胚愈傷組織培養(yǎng)和抗赤霉病體細胞篩；盎i1表拿的資料反映出群體大小的分化情況?？傆鷤麎K

8、和全能性愈傷塊的直徑均值有很大差異，壘能性愈傷組織直徑增長速度明顯高于非全能性愈傷．隨著繼代次數(shù)的增加而愈來愈明顯．兩種愈傷塊內(nèi)．各愈傷塊的生長速度也不相同．其大小分布呈兩頭小、甲間太的趨蟄，方差也隨繼代次數(shù)而增大，方差的增大表明愈傷塊直徑分布更離散。按全能性愈傷塊直徑的均值選留大愈傷．隨著繼代次數(shù)的增加，大愈傷塊的頹率越來越低(表4)。F愈傷塊的生長速度偏高親或超高親，表現(xiàn)出明顯的雜