燕麥ems突變體庫的構(gòu)建及分析

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1、密級：論文編號(hào)：－中國農(nóng)免科學(xué)悅學(xué)位論文燕麥ＥＭＳ突變體庫的構(gòu)建及分析、Ｅｓ化ＷｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＬ化ｒａｒｙｉｎＯａｖｃ／ｉ＂。＂抓Ｘ．心）＇碩±研究生霍朋杰指導(dǎo)教師；張宗文研究員申請學(xué)位類別：農(nóng)業(yè)推廣碩±專業(yè)領(lǐng)域名稱：作物培養(yǎng)單位：作物科學(xué)研究所研究生院２０１５年６月Ｓｅｃｒｅｃ：Ｎｏ．ｙＣｈｉｎｅｓｅＡｘａｄｅｍｙｏｆ乂ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｇ

2、ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＵｂｒａｉｙｉｎ〇２ｉｉＡｖｅｎａｎｕｄａＬ．｛）Ｍ．Ｓ．Ｃａｎｄｉｄａ化；ＨｕｏＰｅｎｇｉｅｊＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＺｏｎｗｅｎｐｇｇＤｅｒｅｅ：Ｍａｓｔｅｒｏｆ乂ｒｉｃ山ｔｕｒａｌＥｘｆ：ｅｎｓｉｏｎｇｇＳｅｃｉａｌｔ：Ｃｒｏｐｙｐ化ｎｅ２０１５獨(dú)創(chuàng)性聲明進(jìn)行的研究工作及取得的研究成本人聲明所呈交的論文是我個(gè)

3、人在導(dǎo)師指導(dǎo)下果。盡我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它一己在論文中作了書而使用過的材斜。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均明確的說明并表示了謝意。■’時(shí)間；＾年月日研究生簽名：奶義啼勺關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明目用學(xué)位論文的規(guī)定，Ｐ：中國農(nóng)業(yè)科本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使，可Ｗ采用影印、縮學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱印

4、或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表。、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容玉年ｉ月日、時(shí)間；研究生簽名；《賄時(shí)間：．年Ｔ月日導(dǎo)師簽名；交爭中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩±學(xué)位論文評閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目燕麥ＥＭＳ突變體庫的構(gòu)建及分析論文作者霍朋杰專業(yè)作物研究方向不區(qū)分研究方向指導(dǎo)教師張宗文培養(yǎng)單位（研究所）作物科學(xué)研究所＾主名職稱４位專業(yè)簽名＾ＩＩ評＾閱―犬：ｉ碩導(dǎo)□中國科學(xué)院遺傳與

5、發(fā)生物化學(xué)與化化Ｉ仿成ｙ乂／博導(dǎo)□育生物學(xué)研究所分子屯領(lǐng)學(xué)！鮮４的＾胃博導(dǎo)□育生物學(xué)研究所分子生物學(xué)／乎伽＆］Ｕ碩導(dǎo)□中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)與作物遺傳氣、州ｐｆｃ曰姑喊Ｉ胃辯博導(dǎo)□生物技術(shù)學(xué)院削叫ｌＡ／ｋ碩導(dǎo)□中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)與作物遺傳：本白巧新權(quán)＾ｎ心委＾胃Ｓ博導(dǎo)□生觀術(shù)學(xué)院育種員王、＊臣碩導(dǎo)□中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物作物種質(zhì)資ＬＹｒ瓦Ｕ／博即科學(xué)研究所源學(xué)ｈ／叩＾碩導(dǎo)□中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物作物種質(zhì)資博導(dǎo)□群研究所

6、源學(xué)ＩＩ［Ｉ會(huì)議記錄（秘書）炎達(dá)聲２０－－論文答辯時(shí)間地點(diǎn)時(shí)間：１５０５２２地點(diǎn)：國家種質(zhì)庫會(huì)議室摘要燕麥?zhǔn)侵匾募Z飼兼用作物，構(gòu)建燕麥EMS突變體庫對燕麥功能基因組學(xué)研究和遺傳改良有重要意義。本實(shí)驗(yàn)利用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯（EMS，ethylmethanesulfonate）處理燕麥品種花早2號(hào)，對M2植株進(jìn)行全生育期調(diào)查，對部分株系進(jìn)行突變位點(diǎn)的分子檢測，主要結(jié)果如下：1、燕麥EMS處理和突變類型鑒定。利用濃度為0.7%的EMS溶液處理花早2號(hào)種子15h，獲得了4083

7、株的M1材料；對其中的2000個(gè)單株種植M2株行，并進(jìn)行全生育期調(diào)查，鑒定其表型變化；對其中2份黃化突變材料種植了M3家系，進(jìn)行黃化突變性狀的穩(wěn)定性驗(yàn)證。結(jié)果表明，燕麥經(jīng)EMS處理后表型變異巨大，在M2代材料共發(fā)現(xiàn)表型突變材料196份，變異率為9.8%，變異類型非常豐富，包括幼苗習(xí)性、葉片、分蘗數(shù)、株高、穗部形態(tài)以及成熟期等多個(gè)突變類型。其中，對部分M3材料種植后證實(shí)，突變的黃化苗特性可以穩(wěn)定遺傳。2、燕麥突變體庫的TILLING檢測。從芹菜中提取CELI內(nèi)切酶粗提物，以合成的含有單個(gè)堿基差異的片段

8、為模板對提取的CELI內(nèi)切酶進(jìn)行活性檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所提取的內(nèi)切酶具有較高的活性；同時(shí)，對酶切反應(yīng)的溫度、酶切時(shí)間、提取物的用量等條件進(jìn)行探索，構(gòu)建了酶切檢測體系。利用該體系，對突變體庫進(jìn)行TILLING檢測，共篩選出兩個(gè)與黃化苗相關(guān)突變位點(diǎn)。3、突變體的分子檢測。利用篩選出的10對SSR引物對288個(gè)二倍池進(jìn)行檢測，檢測到72個(gè)突變位點(diǎn)，最終計(jì)算得出突變頻率為1/20kb。根據(jù)水稻黃化基因和株高基因進(jìn)行特異性引物設(shè)計(jì)98對引物，最終篩選出6對引物可以擴(kuò)增出單一條帶。以