燕麥ems突變體庫的構建及分析

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1、密級：論文編號：－中國農免科學悅學位論文燕麥ＥＭＳ突變體庫的構建及分析、Ｅｓ化ＷｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＬ化ｒａｒｙｉｎＯａｖｃ／ｉ＂。＂抓Ｘ．心）＇碩±研究生霍朋杰指導教師；張宗文研究員申請學位類別：農業(yè)推廣碩±專業(yè)領域名稱：作物培養(yǎng)單位：作物科學研究所研究生院２０１５年６月Ｓｅｃｒｅｃ：Ｎｏ．ｙＣｈｉｎｅｓｅＡｘａｄｅｍｙｏｆ乂ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｇ

2、ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＵｂｒａｉｙｉｎ〇２ｉｉＡｖｅｎａｎｕｄａＬ．｛）Ｍ．Ｓ．Ｃａｎｄｉｄａ化；ＨｕｏＰｅｎｇｉｅｊＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＺｏｎｗｅｎｐｇｇＤｅｒｅｅ：Ｍａｓｔｅｒｏｆ乂ｒｉｃ山ｔｕｒａｌＥｘｆ：ｅｎｓｉｏｎｇｇＳｅｃｉａｌｔ：Ｃｒｏｐｙｐ化ｎｅ２０１５獨創(chuàng)性聲明進行的研究工作及取得的研究成本人聲明所呈交的論文是我個

3、人在導師指導下果。盡我所知，除了文中特別加Ｗ標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經發(fā)教育機構的學位或證表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農業(yè)科學院或其它一己在論文中作了書而使用過的材斜。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均明確的說明并表示了謝意。■’時間；＾年月日研究生簽名：奶義啼勺關于論文使用授權的聲明目用學位論文的規(guī)定，Ｐ：中國農業(yè)科本人完全了解中國農業(yè)科學院有關保留、使，可Ｗ采用影印、縮學院有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱印

4、或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意中國農業(yè)科學院可Ｗ用不同方式在不同媒體上發(fā)表。、傳播學位論文的全部或部分內容玉年ｉ月日、時間；研究生簽名；《賄時間：．年Ｔ月日導師簽名；交爭中國農業(yè)科學院碩±學位論文評閱人、答辯委員會簽名表論文題目燕麥ＥＭＳ突變體庫的構建及分析論文作者霍朋杰專業(yè)作物研究方向不區(qū)分研究方向指導教師張宗文培養(yǎng)單位（研究所）作物科學研究所＾主名職稱４位專業(yè)簽名＾ＩＩ評＾閱―犬：ｉ碩導□中國科學院遺傳與

5、發(fā)生物化學與化化Ｉ仿成ｙ乂／博導□育生物學研究所分子屯領學！鮮４的＾胃博導□育生物學研究所分子生物學／乎伽＆］Ｕ碩導□中國農業(yè)大學農業(yè)與作物遺傳氣、州ｐｆｃ曰姑喊Ｉ胃辯博導□生物技術學院削叫ｌＡ／ｋ碩導□中國農業(yè)大學農業(yè)與作物遺傳：本白巧新權＾ｎ心委＾胃Ｓ博導□生觀術學院育種員王、＊臣碩導□中國農業(yè)科學院作物作物種質資ＬＹｒ瓦Ｕ／博即科學研究所源學ｈ／叩＾碩導□中國農業(yè)科學院作物作物種質資博導□群研究所

6、源學ＩＩ［Ｉ會議記錄（秘書）炎達聲２０－－論文答辯時間地點時間：１５０５２２地點：國家種質庫會議室摘要燕麥是重要的糧飼兼用作物，構建燕麥EMS突變體庫對燕麥功能基因組學研究和遺傳改良有重要意義。本實驗利用化學誘變劑甲基磺酸乙酯（EMS，ethylmethanesulfonate）處理燕麥品種花早2號，對M2植株進行全生育期調查，對部分株系進行突變位點的分子檢測，主要結果如下：1、燕麥EMS處理和突變類型鑒定。利用濃度為0.7%的EMS溶液處理花早2號種子15h，獲得了4083

7、株的M1材料；對其中的2000個單株種植M2株行，并進行全生育期調查，鑒定其表型變化；對其中2份黃化突變材料種植了M3家系，進行黃化突變性狀的穩(wěn)定性驗證。結果表明，燕麥經EMS處理后表型變異巨大，在M2代材料共發(fā)現表型突變材料196份，變異率為9.8%，變異類型非常豐富，包括幼苗習性、葉片、分蘗數、株高、穗部形態(tài)以及成熟期等多個突變類型。其中，對部分M3材料種植后證實，突變的黃化苗特性可以穩(wěn)定遺傳。2、燕麥突變體庫的TILLING檢測。從芹菜中提取CELI內切酶粗提物，以合成的含有單個堿基差異的片段

8、為模板對提取的CELI內切酶進行活性檢測，結果發(fā)現所提取的內切酶具有較高的活性；同時，對酶切反應的溫度、酶切時間、提取物的用量等條件進行探索，構建了酶切檢測體系。利用該體系，對突變體庫進行TILLING檢測，共篩選出兩個與黃化苗相關突變位點。3、突變體的分子檢測。利用篩選出的10對SSR引物對288個二倍池進行檢測，檢測到72個突變位點，最終計算得出突變頻率為1/20kb。根據水稻黃化基因和株高基因進行特異性引物設計98對引物，最終篩選出6對引物可以擴增出單一條帶。以