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《轉(zhuǎn)錄因子creb在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、R34公開分類號：____________密級：______________ＵＤＣ：____________單位代碼：______________11646碩士學(xué)位論文論文題目：轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究學(xué)號：_________________________1211076002姓名：_________________________王雪生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)名稱：_________________________醫(yī)學(xué)院學(xué)院：_________________________王萍指導(dǎo)教師：_____________________________________
2、_____________副教授論文提交日期：2015年04月13日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeEffectsoftranscriptionfactorCREBonmediatingrenaltumorigenesisandmetastasisCandidate：XueWangSupervisors：(Associate)ProfessorPingWangFacultyofMedicineNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADate04/13/2015獨(dú)創(chuàng)性聲
3、明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得寧波大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。簽名：___________日期：____________關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解寧波大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制
4、手段保存論文。（保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定）簽名：___________導(dǎo)師簽名：___________日期：____________轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究摘要腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率約占全部腎癌的70-75%。cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)，是細(xì)胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子。它與靶基因啟動子區(qū)域的CRE(cAMPresponseelement)序列結(jié)合后，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而參與調(diào)控細(xì)胞周期、增殖和遷移等多種細(xì)胞功能。新近研究發(fā)現(xiàn)，CREB蛋白水平在部分癌組織和細(xì)胞中
5、呈顯著性高表達(dá)。我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，阻斷CREB與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的結(jié)合能顯著性抑制腫瘤細(xì)胞的生長，和抗癌藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡。由此可見，CREB極有可能是機(jī)體內(nèi)的一種原癌基因。然而，CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的作用及其分子機(jī)制尚不清楚。本研究首先檢測腎癌和癌旁組織、腎上皮細(xì)胞（HK-2）和腎癌細(xì)胞系（ACHN、786-O、OS-RC-2）中pCREB和totalCREB(tCREB)的表達(dá)情況；其次，構(gòu)建定點(diǎn)突變133位絲氨酸的重組質(zhì)粒和siRNA轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞系，降低細(xì)胞內(nèi)pCREB水平；第三，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究pCREB與腎癌細(xì)胞增殖的關(guān)系；第四，劃痕和transwell實(shí)驗(yàn)探討pCREB對
6、腎癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響、以及免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測絲狀偽足在腎癌細(xì)胞遷移中的作用；最后，westernblot、生物信息學(xué)和chip實(shí)驗(yàn)分析pCREB介導(dǎo)腎癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pCREB在腎癌組織及腎癌細(xì)胞系中的表達(dá)顯著性高于癌旁組織和HK-2細(xì)胞；降低pCREB水平后，腎癌細(xì)胞的體外生長和裸鼠成瘤能力顯著性被抑制；在降低腎癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的同時(shí)，伴隨著MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)的減少、以及絲狀偽足的消失。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，pCREB通過調(diào)控EMT相關(guān)蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Fibronectin）的表達(dá)影響腎癌轉(zhuǎn)移。有趣的是，pCREB水平高低并不影響Vi
7、mentin的蛋白表達(dá)和纖維排列。生物信息學(xué)軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ibronectin啟動子區(qū)域存在CRE序列，而Vimentin的啟動子區(qū)僅含有CRE-BP結(jié)合位點(diǎn)；chip實(shí)驗(yàn)證實(shí)了pCREB能直接結(jié)合Fibronectin基因，而不調(diào)控Vimentin基因。由此可見，降低pCREB水平能抑制腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。其抑制轉(zhuǎn)移的機(jī)制是通過改變細(xì)胞骨架微絲纖維的重排和調(diào)控上皮間質(zhì)化相關(guān)蛋白的表達(dá)。然而，與間
