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1、碩士學位論文Na+-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運多肽的表達純化與行為表征的研究THEEXPRESSIONPURIFICATIONANDBEHAVIORALCHARACTERIZATIONOFNTCP熊智哈爾濱工業(yè)大學2018年6月國內(nèi)圖書分類號：Q71學校代碼：10213國際圖書分類號：577.21密級：公開碩士學位論文Na+-牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運多肽的表達純化與行為表征的研究碩士研究生：熊智導師：黃志偉教授申請學位：理學碩士學科：生物學所在單位：生命科學與技術(shù)學院答辯日期：2018年6月授予學位單位：哈爾濱工業(yè)大學ClassifiedIndex:Q71U.D.C:577.21Dissertatio
2、nfortheMasterDegreeTHEEXPRESSIONPURIFICATIONANDBEHAVIORALCHARACTERIZATIONOFNTCPCandidate：XiongZhiSupervisor：Prof.HuangZhiweiAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：BiologyAffiliation：SchoolofLifeScienceandTechnologyDateofDefence：June,2018Degree-Conferring-Institution：HarbinInstitut
3、eofTechnology哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文摘要鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運多肽（sodiumtaurocholatecotransportingpolypeptide,NTCP）是第10個溶質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白（solutecarrierSLC10）家族的一名成員。NTCP蛋白特異性地在肝細胞的基底膜上表達，其負責調(diào)控肝腸的膽汁酸循環(huán)，以維持機體的膽汁酸平衡。最新研究發(fā)現(xiàn)，NTCP蛋白是乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus,HBV）和丁型肝炎病毒（HepatitisDvirus,HDV）感染肝細胞的功能性受體。所以獲得NTCP的結(jié)構(gòu)，對乙肝的治療及對NTCP的功能的進一步闡
4、述具有重大意義。本課題以人類、小鼠、大鼠、樹鼩、食蟹猴的NTCP蛋白為研究對象，根據(jù)這5個物種的NTCP片段設計相應的引物，克隆出這5種NTCP基因片段，并分別構(gòu)建重組表達載體，以昆蟲細胞為表達宿主，利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)獲得目的蛋白。通過Ni柱親和層析對目的蛋白進行富集粗提；然后利用AKTAFPLC純化系統(tǒng)，通過Superdex200觀察目的蛋白與不同去垢劑的結(jié)合情況，找出合適的去垢劑用于蛋白的純化，為后續(xù)的結(jié)晶做準備。本課題通過PCR反應獲得了人類、小鼠、大鼠、樹鼩、食蟹猴的NTCP基因片段，并將這些NTCP基因片段分別與帶有不同標簽的pFastBac構(gòu)建了
5、重組載體。利用這些重組載體轉(zhuǎn)化DH10感受態(tài)細胞，再通過藍白斑篩選得到了帶有不同標簽的NTCP重組黏粒。用轉(zhuǎn)染試劑將這些NTCP重組黏粒轉(zhuǎn)染昆蟲細胞獲得重組桿狀病毒用于感染昆蟲細胞，實現(xiàn)了帶不同標簽的NTCP蛋白在昆蟲細胞中的表達。通過對比這些NTCP蛋白在昆蟲細胞中的表達量，發(fā)現(xiàn)帶SUMO標簽和MBP標簽的樹鼩的NTCP蛋白的表達量較多。觀察帶MBP標簽的樹鼩的NTCP蛋白在Superdex200與不同去垢劑的結(jié)合情況，發(fā)現(xiàn)樹鼩的NTCP蛋白在去垢劑C325S中有較好的行為表現(xiàn)。最后，在純化樹鼩的NTCP蛋白時，讓樹鼩的NTCP蛋白先與多肽Myr47結(jié)合后，再觀察其在去垢劑C3
6、25S中的行為表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)樹鼩的NTCP蛋白先與多肽Myr47結(jié)合后，聚合的樹鼩的NTCP蛋白減少了。本課題的研究為抗HBV新藥的研發(fā)提供一些參考價值。關(guān)鍵詞：鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運多肽；乙型肝炎病毒；蛋白純化；行為表征I哈爾濱工業(yè)大學理學碩士學位論文AbstractSodium-taurocholatecotransportingpolypeptide(NTCP)isamemberofthetenthsolutecarrier(SLC10)family.TheNTCPproteinspecificallyexpressedinthebasementmembraneofliverc
7、ellsthatareresponsiblefortheregulationofbileacidenterohepaticcirculationofbileacidsinordertomaintainthebalanceofthebody.ThelateststudyfoundthattheNTCPproteinisfunctionalreceptorsforhepatocytesinfectedbyHepatitisBvirusandHepatitisDvirus.Theref
