山羊副流感病毒3型hn基因原核表達與單克隆抗體的制備

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1、：１分類號：Ｓ８５５．３０３６４單位代碼密級：學號２７２０２３８：１各傲怎也；ｔｆ學位論文山羊副流感病毒３型巧７Ｖ基因原核表達與單克隆抗體的制備ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＨＮＧｅｎｅｏｆＣａｐｒｉｎｅＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＴｅ３ａｎｄＰｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＩｔｓＭｏｎｏｃｌｏｎａｌｙｐｐＡｎｔｉｂｏｄｙ研究生：鄧加武指導教師：魏律庶教授合作指導教＂巧：江杰元研究員申請學位口類級別：農(nóng)學碩±專業(yè)名稱

2、：預防獸醫(yī)學研究方向：家畜傳染病學所在學院：動物科技學院＇答辯委員會主席：抑屯Ｉ二零一五年六月AnhuiAgriculturalUniversityDissertationfortheMasterateProkaryoticExpressionoftheHNGeneofCaprineParainfluenzaVirusType3andPreparationofItsMonoclonalAntibodyCandidate:DengJiawuSupervisor:Prof.WeiJianzhongCooperantSupe

3、rvirsor:Prof.JiangJieyuanAcademicDegreeappliedfor:MasterofAgricultureSpeciality:PreventiveVeterinaryScienceResearchfield:InfectiousdiseasesofdomesticanimalsCollege:AnimalScienceandTechnologyCollegeJune,2015獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研巧工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已

4、經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料一。與我同工作的同志對本研巧所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。＾／王研究生簽名：巧如時間：／年月孩日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明目本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，Ｐ：學校巧權(quán)保留送交論文的復印件和髓盤，允許論文被查閱和借閱，可レッ采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學可抖用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。乂保密的學位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）

5、＾研巧生簽名：抑加時間ｇ日：如年月，＾第：導師簽名時巧；／ｄ年月Ｓ曰中文摘要副流感病毒3型（parainfluenzavirustype3，PIV3）屬于副粘病毒科呼吸道病毒屬，是囊膜的單股負鏈RNA病毒，是引起人和動物呼吸道疾病的重要病原，包括：人副流感病毒3型（Humanparainfluenzavirustype3，HPIV3）和牛副流感病毒3型（Bovineparainfluenzavirustype3，BPIV3）。目前國內(nèi)外對HPIV3與BPIV3的研究報道較為廣泛，但PIV3在羊群中的感染情況在國內(nèi)外都鮮有報道。本實驗室從發(fā)病山

6、羊中分離出一株新的PIV3病毒，命名為為山羊副流感病毒3型（Caprineparainfluenzavirus3，CPIV3）JS2013。因此為監(jiān)測該病在羊群中的流行情況，急需建立一種病原學及血清學檢測方法，為開展流行病學調(diào)查提供依據(jù)。PIV3基因組至少編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白，即NP、P、M、F、HN和L蛋白，其中HN蛋白和F蛋白是副流感病毒3型的主要保護性抗原。HN蛋白存在至少6個抗原表位，其N端具有強烈的疏水性，從而使HN蛋白能夠牢固地嵌入病毒囊膜的雙層質(zhì)膜內(nèi)，3個中和性抗原表位均存在于其中。因此本研究利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)，成功表達PIV3JS2013重組

7、蛋白His-HN，并制備出針對CPIV3HN的單克隆抗體，以期為副流感病毒3型診斷方法的建立和HN蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容包括：1、CPIV3JS2013HN基因片段克隆與表達參考GenBank中發(fā)表的牛副流感病毒3型（BPIV3）內(nèi)蒙09毒株（NM09）全基因組序列（GenBank登錄號:JQ063064），設(shè)計一對特異性引物擴增山羊副流感病毒3型（CPIV3）JS2013株HN基因部分序列，將擴增得到的基因進行測序，比對分析其與已報道HPIV3、BPIV3的序列同源性最高分別為74.3%、79.8%。進化分析表明JS2013株并不屬于H

8、PIV3與BPIV3，形成一個獨立的分