山羊副流感病毒3型hn基因原核表達(dá)與單克隆抗體的制備

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1、：１分類號(hào)：Ｓ８５５．３０３６４單位代碼密級(jí)：學(xué)號(hào)２７２０２３８：１各傲怎也；ｔｆ學(xué)位論文山羊副流感病毒３型巧７Ｖ基因原核表達(dá)與單克隆抗體的制備ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＨＮＧｅｎｅｏｆＣａｐｒｉｎｅＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＴｅ３ａｎｄＰｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＩｔｓＭｏｎｏｃｌｏｎａｌｙｐｐＡｎｔｉｂｏｄｙ研究生：鄧加武指導(dǎo)教師：魏律庶教授合作指導(dǎo)教＂巧：江杰元研究員申請(qǐng)學(xué)位口類級(jí)別：農(nóng)學(xué)碩±專業(yè)名稱

2、：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：家畜傳染病學(xué)所在學(xué)院：動(dòng)物科技學(xué)院＇答辯委員會(huì)主席：抑屯Ｉ二零一五年六月AnhuiAgriculturalUniversityDissertationfortheMasterateProkaryoticExpressionoftheHNGeneofCaprineParainfluenzaVirusType3andPreparationofItsMonoclonalAntibodyCandidate:DengJiawuSupervisor:Prof.WeiJianzhongCooperantSupe

3、rvirsor:Prof.JiangJieyuanAcademicDegreeappliedfor:MasterofAgricultureSpeciality:PreventiveVeterinaryScienceResearchfield:InfectiousdiseasesofdomesticanimalsCollege:AnimalScienceandTechnologyCollegeJune,2015獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研巧工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已

4、經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研巧所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。＾／王研究生簽名：巧如時(shí)間：／年月孩日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明目本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，Ｐ：學(xué)校巧權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和髓盤，允許論文被查閱和借閱，可レッ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可抖用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。乂保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）

5、＾研巧生簽名：抑加時(shí)間ｇ日：如年月，＾第：導(dǎo)師簽名時(shí)巧；／ｄ年月Ｓ曰中文摘要副流感病毒3型（parainfluenzavirustype3，PIV3）屬于副粘病毒科呼吸道病毒屬，是囊膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，是引起人和動(dòng)物呼吸道疾病的重要病原，包括：人副流感病毒3型（Humanparainfluenzavirustype3，HPIV3）和牛副流感病毒3型（Bovineparainfluenzavirustype3，BPIV3）。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)HPIV3與BPIV3的研究報(bào)道較為廣泛，但PIV3在羊群中的感染情況在國(guó)內(nèi)外都鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室從發(fā)病山

6、羊中分離出一株新的PIV3病毒，命名為為山羊副流感病毒3型（Caprineparainfluenzavirus3，CPIV3）JS2013。因此為監(jiān)測(cè)該病在羊群中的流行情況，急需建立一種病原學(xué)及血清學(xué)檢測(cè)方法，為開展流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。PIV3基因組至少編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白，即NP、P、M、F、HN和L蛋白，其中HN蛋白和F蛋白是副流感病毒3型的主要保護(hù)性抗原。HN蛋白存在至少6個(gè)抗原表位，其N端具有強(qiáng)烈的疏水性，從而使HN蛋白能夠牢固地嵌入病毒囊膜的雙層質(zhì)膜內(nèi)，3個(gè)中和性抗原表位均存在于其中。因此本研究利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)，成功表達(dá)PIV3JS2013重組

7、蛋白His-HN，并制備出針對(duì)CPIV3HN的單克隆抗體，以期為副流感病毒3型診斷方法的建立和HN蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容包括：1、CPIV3JS2013HN基因片段克隆與表達(dá)參考GenBank中發(fā)表的牛副流感病毒3型（BPIV3）內(nèi)蒙09毒株（NM09）全基因組序列（GenBank登錄號(hào):JQ063064），設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物擴(kuò)增山羊副流感病毒3型（CPIV3）JS2013株HN基因部分序列，將擴(kuò)增得到的基因進(jìn)行測(cè)序，比對(duì)分析其與已報(bào)道HPIV3、BPIV3的序列同源性最高分別為74.3%、79.8%。進(jìn)化分析表明JS2013株并不屬于H

8、PIV3與BPIV3，形成一個(gè)獨(dú)立的分