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1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)組份濃度：1MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.稱(chēng)量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。PH值濃HCl7.4約70ml7.6約60ml8.0約42ml4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2)10×TEBuffer
2、(pH7.4,7.6,8.0)組份濃度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）100ml500mMEDTA(PH8.0)20ml2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，均勻混合。3.將溶液定容至1L后，高溫高壓滅菌。4.室溫保存。3)1.5MTris-HCl(pH8.8)組份濃度：1.5MTris-HCl配制量：1L配制方法：1.稱(chēng)量181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?/p>
3、。3.用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。4)3M醋酸鈉(pH5.2)組份濃度：3M醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1.稱(chēng)量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。5)PBSBuffer組份濃度：137mMNa
4、Cl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：1L配制方法：1.稱(chēng)量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6)10M醋酸銨組份濃度：10M醋酸銨配制量：100ml配制方法：1.稱(chēng)量77.1g醋
5、酸銨置于100～200ml燒杯中，加入約30ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至100ml。3.使用0.22mm濾膜過(guò)濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7)苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法：1.說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。2.配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24:1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
6、8）10％(W/V)SDS組份濃度：10％(W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.稱(chēng)量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68℃加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后，室溫保存。9）2NNaOH組份濃度：2NNaOH配制量：100ml配制方法：1.量取80ml去離子水置于100～200ml塑料燒杯中（NaOH溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2.稱(chēng)取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至
7、100ml。4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10）2.5NHCl組份濃度：2.5NHCl配制量：100ml配制方法：1.在78.4ml的去離子水中加入21.6ml的濃鹽酸（11.6N)，均勻混合。2.室溫保存。11）5MNaCl組份濃度：5MNaCl配制量：1L配制方法：1.稱(chēng)取292.2gNaCl置于1L燒杯中，加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。3.高溫高壓滅菌后，4℃保存。11）20％(W/V)Glucose組份濃度：20％(W/V)Glucose配制量：100ml配制方
8、法：1.稱(chēng)取20gGlucose置于100～200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水后，攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至100ml。3.高溫高壓滅菌后，4℃保存。12）SolutionI(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25
