骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究

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1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究姓名：段祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張煥相20070501骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究作者：段祥學(xué)位授予單位：蘇州大學(xué)相似文獻(xiàn)(10條)1.期刊論文王志順.王江泳.王保芝.王琳.劉長(zhǎng)安.王麗.劉貴生.WangZhi-shun.WangJiang-yong.WangBao-zhi.WangLin.LiuChang-an.WangLi.LiuGui-sheng骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的超微結(jié)構(gòu)改變-中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)2009,13(1)背景:目前尚缺乏骨髓

2、間充質(zhì)干細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的觀察.目的:采用全骨髓培養(yǎng)-貼壁篩選法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞方向分化,利用光鏡和電鏡觀察誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)分化細(xì)胞的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn).設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn):觀察實(shí)驗(yàn),于2007-03/2008-04在河北醫(yī)科大學(xué)人體解剖教研室和白求恩國(guó)際和平醫(yī)院骨科完成.材料:成年新西蘭大白兔由自求恩國(guó)際和平醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.HitachiS-3500N型掃描電鏡和Hitachi-7500型透射電鏡.方法:從新西蘭大白兔骼后上嵴處抽取骨髓.經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)后,取部分第3代細(xì)胞加入誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)劑為10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉,10-8mmo

3、l/L地塞米松,50mg/L維生素C.培養(yǎng)2周后,誘導(dǎo)和未加誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶、骨形態(tài)發(fā)生蛋白和鈣化結(jié)節(jié)檢測(cè).主要觀察指標(biāo):光鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細(xì)胞的一般形態(tài)學(xué)特征;電鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn).結(jié)果:培養(yǎng)的第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,其堿性磷酸酶染色呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng);鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè),均呈現(xiàn)陰性結(jié)果.經(jīng)向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化后,其堿性磷酸酶染色,鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè),均呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng).光鏡和掃描電鏡觀察顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞大部分呈長(zhǎng)梭形,少量呈星形;經(jīng)向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化后,細(xì)胞體積增大,

4、更加飽滿,似魚(yú)群樣排列.透射電鏡觀察顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞器較豐富,向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化后,其線粒體明顯增多,出現(xiàn)較多的基質(zhì)小泡、髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu).結(jié)論:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為胞漿中出現(xiàn)增多的基質(zhì)小泡、髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu).2.學(xué)位論文梁文杰豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性的實(shí)驗(yàn)研究2007研究背景及意義：嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染、腫瘤等原因所致的骨缺損在臨床治療中非常常見(jiàn)。目前常用的治療方法是植骨術(shù)，而嚴(yán)重的骨缺損用現(xiàn)有的方法難以獲得滿意的療效，骨組織工程的興起為解決大段骨缺損的難題提供了新的途徑。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcell，

5、MSCs)被認(rèn)為是骨組織工程最佳的種子細(xì)胞。因?yàn)檫@種細(xì)胞取材方便，可通過(guò)穿刺獲得，創(chuàng)傷小，取材后并發(fā)癥少，細(xì)胞培養(yǎng)增殖快，在體內(nèi)外成骨誘導(dǎo)環(huán)境下可分化為骨組織，而且具有多向分化潛能；此外，MSCs也容易分離和培養(yǎng)。盡管自體MSCs或成骨細(xì)胞用于動(dòng)物及臨床個(gè)體化治療已經(jīng)取得了良好的結(jié)果，但MSCs在骨髓中含量很少，并隨著年齡的增長(zhǎng)減少；現(xiàn)有方法體外迅速擴(kuò)增困難。而且一些自身免疫性疾病患者，其MSCs增殖能力明顯減弱。隨著培養(yǎng)代數(shù)增加可能出現(xiàn)“反分化”現(xiàn)象和致瘤性，從而失去了細(xì)胞應(yīng)有的功能和安全性。因此，自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用會(huì)受來(lái)源和數(shù)量限制，難以滿足臨床“隨取隨用”的要求。建立同種異

6、體MSCs種子細(xì)胞庫(kù)是解決這些問(wèn)題的捷徑，也是組織工程從實(shí)驗(yàn)室走向產(chǎn)業(yè)化的重要前提。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)MSCs具有免疫調(diào)節(jié)作用，已往低等級(jí)動(dòng)物模型也證明同種異體種子細(xì)胞及其構(gòu)建的組織工程肌腱、軟骨、骨組織植入體內(nèi)免疫反應(yīng)輕微，不足以影響工程化組織植入體內(nèi)后的修復(fù)功能。因此，同種異體骨組織工程研究前景充滿潛力和希望。目的：(1)豬骨髓分離培養(yǎng)MSCs并在體外誘導(dǎo)成骨細(xì)胞，并對(duì)其細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行觀察，探討MSCs最佳的培養(yǎng)方法和條件；(2)研究MSCs成骨誘導(dǎo)分化后在不同條件下對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響及細(xì)胞因子分泌情況；研究MSCs免疫原性及：IFN-γ對(duì)其免疫原性的影響，探討MS

7、Cs免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)；(3)成骨誘導(dǎo)分化后MSCs與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合構(gòu)建組織工程骨，植入豬皮下并和單純脫鈣骨基質(zhì)材料植入進(jìn)行比較，以了解同種異體組織工程骨在體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)程度及異位成骨能力。從而了解以MSCs為種子細(xì)胞的同種異體組織工程骨移植的可行性。方法：1．豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性(1)無(wú)菌條件下在小香豬髂嵴處穿刺抽取2-5ml骨髓，經(jīng)密度梯度離心分離提純MSCs，分別培養(yǎng)在含5％胎牛血清的。A-DME