骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞、成骨細胞誘導(dǎo)分化的研究

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1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞、成骨細胞誘導(dǎo)分化的研究姓名：段祥申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張煥相20070501骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞、成骨細胞誘導(dǎo)分化的研究作者：段祥學(xué)位授予單位：蘇州大學(xué)相似文獻(10條)1.期刊論文王志順.王江泳.王保芝.王琳.劉長安.王麗.劉貴生.WangZhi-shun.WangJiang-yong.WangBao-zhi.WangLin.LiuChang-an.WangLi.LiuGui-sheng骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞誘導(dǎo)分化的超微結(jié)構(gòu)改變-中國組織工程研究與臨床康復(fù)2009,13(1)背景:目前尚缺乏骨髓

2、間充質(zhì)干細胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細胞超微結(jié)構(gòu)特點的觀察.目的:采用全骨髓培養(yǎng)-貼壁篩選法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞,誘導(dǎo)其向成骨細胞方向分化,利用光鏡和電鏡觀察誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)分化細胞的細微和超微結(jié)構(gòu)特點.設(shè)計、時間及地點:觀察實驗,于2007-03/2008-04在河北醫(yī)科大學(xué)人體解剖教研室和白求恩國際和平醫(yī)院骨科完成.材料:成年新西蘭大白兔由自求恩國際和平醫(yī)院實驗動物中心提供.HitachiS-3500N型掃描電鏡和Hitachi-7500型透射電鏡.方法:從新西蘭大白兔骼后上嵴處抽取骨髓.經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)后,取部分第3代細胞加入誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)劑為10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉,10-8mmo

3、l/L地塞米松,50mg/L維生素C.培養(yǎng)2周后,誘導(dǎo)和未加誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細胞進行堿性磷酸酶、骨形態(tài)發(fā)生蛋白和鈣化結(jié)節(jié)檢測.主要觀察指標(biāo):光鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細胞的一般形態(tài)學(xué)特征;電鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細胞和成骨細胞的超微結(jié)構(gòu)特點.結(jié)果:培養(yǎng)的第3代骨髓間充質(zhì)干細胞,其堿性磷酸酶染色呈強陽性反應(yīng);鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測,均呈現(xiàn)陰性結(jié)果.經(jīng)向成骨細胞誘導(dǎo)分化后,其堿性磷酸酶染色,鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測,均呈現(xiàn)陽性反應(yīng).光鏡和掃描電鏡觀察顯示,骨髓間充質(zhì)干細胞大部分呈長梭形,少量呈星形;經(jīng)向成骨細胞誘導(dǎo)分化后,細胞體積增大,

4、更加飽滿,似魚群樣排列.透射電鏡觀察顯示,骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞器較豐富,向成骨細胞誘導(dǎo)分化后,其線粒體明顯增多,出現(xiàn)較多的基質(zhì)小泡、髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu).結(jié)論:骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化后細胞的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為胞漿中出現(xiàn)增多的基質(zhì)小泡、髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu).2.學(xué)位論文梁文杰豬骨髓間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性的實驗研究2007研究背景及意義：嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染、腫瘤等原因所致的骨缺損在臨床治療中非常常見。目前常用的治療方法是植骨術(shù)，而嚴(yán)重的骨缺損用現(xiàn)有的方法難以獲得滿意的療效，骨組織工程的興起為解決大段骨缺損的難題提供了新的途徑。骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcell，

5、MSCs)被認為是骨組織工程最佳的種子細胞。因為這種細胞取材方便，可通過穿刺獲得，創(chuàng)傷小，取材后并發(fā)癥少，細胞培養(yǎng)增殖快，在體內(nèi)外成骨誘導(dǎo)環(huán)境下可分化為骨組織，而且具有多向分化潛能；此外，MSCs也容易分離和培養(yǎng)。盡管自體MSCs或成骨細胞用于動物及臨床個體化治療已經(jīng)取得了良好的結(jié)果，但MSCs在骨髓中含量很少，并隨著年齡的增長減少；現(xiàn)有方法體外迅速擴增困難。而且一些自身免疫性疾病患者，其MSCs增殖能力明顯減弱。隨著培養(yǎng)代數(shù)增加可能出現(xiàn)“反分化”現(xiàn)象和致瘤性，從而失去了細胞應(yīng)有的功能和安全性。因此，自體骨髓間充質(zhì)干細胞的應(yīng)用會受來源和數(shù)量限制，難以滿足臨床“隨取隨用”的要求。建立同種異

6、體MSCs種子細胞庫是解決這些問題的捷徑，也是組織工程從實驗室走向產(chǎn)業(yè)化的重要前提。近年來，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)MSCs具有免疫調(diào)節(jié)作用，已往低等級動物模型也證明同種異體種子細胞及其構(gòu)建的組織工程肌腱、軟骨、骨組織植入體內(nèi)免疫反應(yīng)輕微，不足以影響工程化組織植入體內(nèi)后的修復(fù)功能。因此，同種異體骨組織工程研究前景充滿潛力和希望。目的：(1)豬骨髓分離培養(yǎng)MSCs并在體外誘導(dǎo)成骨細胞，并對其細胞生物學(xué)特性進行觀察，探討MSCs最佳的培養(yǎng)方法和條件；(2)研究MSCs成骨誘導(dǎo)分化后在不同條件下對外周血單個核細胞增殖的影響及細胞因子分泌情況；研究MSCs免疫原性及：IFN-γ對其免疫原性的影響，探討MS

7、Cs免疫調(diào)節(jié)機制，為體內(nèi)實驗提供依據(jù)；(3)成骨誘導(dǎo)分化后MSCs與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合構(gòu)建組織工程骨，植入豬皮下并和單純脫鈣骨基質(zhì)材料植入進行比較，以了解同種異體組織工程骨在體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)程度及異位成骨能力。從而了解以MSCs為種子細胞的同種異體組織工程骨移植的可行性。方法：1．豬骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性(1)無菌條件下在小香豬髂嵴處穿刺抽取2-5ml骨髓，經(jīng)密度梯度離心分離提純MSCs，分別培養(yǎng)在含5％胎牛血清的。A-DME