液相色譜系統(tǒng)

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1、液相色譜系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。液相色譜儀分離過程是儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據以圖譜形式打印出來第二質譜儀分析原理質譜儀按應用范圍分為同位素質譜儀、無機質譜儀和有機質譜儀；按分辨能力分為高分辨、中

2、分辨和低分辨質譜儀；按工作原理分為靜態(tài)儀器和動態(tài)儀器。質譜儀能用高能電子流等轟擊樣品分子，使該分子失去電子變?yōu)閹д姾傻姆肿与x子和碎片離子。這些不同離子具有不同的質量，質量不同的離子在磁場的作用下到達檢測器的時間不同，其結果為質譜圖。質譜儀以離子源、質量分析器和離子檢測器為核心。離子源是使樣品分子在高真空條件下離子化的裝置。電離后的分子因接受了過多的能量會進一步碎裂成較小質量的多種碎片離子和中性粒子。它們在加速電場作用下獲取具有相同能量的平均動能而進入質量分析器。質量分析器是將同時進入其中的不同質量的離子，按質荷比m/e大小

3、分離的裝置。分離后的離子依次進入離子檢測器，采集放大離子信號，經計算機處理，繪制成質譜圖。離子源、質量分析器和離子檢測器都各有多種類型。近幾年來液-質聯(lián)用技術得到廣泛使用的原因是液相色譜能夠高效分離和定量樣品，但是不能知道樣品中各種物質是什么，再通過質譜分析就可以鑒定樣品，進而研究樣品的分子功能。第三我們看一下液-質聯(lián)用技術與雙向電泳比較1誤差小雙向電泳分析樣品時，經過一向等電聚焦，二向按分子量大小分離后，必須用軟件進行分析，畫點，比對，但是經過這兩個軟件分析過程中人為誤差比較大。而用液相色譜分析樣品時，樣品濃度以電信號方式

4、表示出來，人為誤差較小。2速度快雙向電泳分析樣品最快要兩天時間，用液相色譜分析樣品僅用十幾分鐘就可以了。3分辨率高4液相色譜柱可重復使用5自動化操作，分析精確度高第四液-質聯(lián)用技術的應用1用于植物系統(tǒng)的分析非標記液-質聯(lián)用技術用于比較野生型擬南芥和擬南芥缺乏葡萄糖磷酸變位酶活性（PGM）突變體分析，并結合代謝物特征，肽的量化，生物信息學分析，相應數(shù)據顯示一些蛋白和代謝物有助于區(qū)分野生型和PGM型。2植物離體細胞器的分析大多數(shù)研究利用雙向電泳技術植物細胞幾個亞細胞部分進行了研究，包括葉綠體、線粒體、核、液泡、過氧化物酶、微粒體

5、膜、質膜和細胞壁、質外體。但是由于一些蛋白質在細胞器中的表達量太低，用雙向電泳很難分離和鑒定，而液-質聯(lián)用技術可以較好地分離和鑒定低豐度蛋白質，進而深入研究確定細胞器中蛋白質的分子功能。3蛋白質組分的分析嵌入式膜蛋白質在營養(yǎng)、水的運輸、感覺和信號轉導過程是必不可少。植物膜蛋白質的特性化是非常理想的，因為膜蛋白的低豐度和不同的生化特性，應用以凝膠為基礎的蛋白質分析方法是行不通的，所以經常運用液-質聯(lián)用技術分析膜蛋白質。4翻譯后修飾的分析翻譯后修飾的闡明是蛋白質組研究中最具挑戰(zhàn)性的課題，液-質聯(lián)用技術可以大規(guī)模鑒定磷酸化點。因為

6、磷酸化蛋白質是蛋白質組的一小部分，需要在定量和鑒定之前有效的富集，一些預分離技術，如：固定金屬親和層析（IMAC）和免疫共沉淀技術得到廣泛的應用。應用液-質聯(lián)用技術在花椰菜中發(fā)現(xiàn)了新的水通道蛋白亞型，揭示了多種多樣的翻譯后修飾，如乙?；谆土姿峄?。