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1、高效液相色譜王光忠，李秋怡，張蓮萍，劉焱文【關(guān)鍵詞】柴胡；,,高效液相色譜 摘要：目的制定柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量測定方法。方法用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法（HPLCELSD）,AlltimaC18色譜柱,流動相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml?min1；蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。結(jié)果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分別在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。結(jié)論該方法簡便、靈敏、可靠、準(zhǔn)確、
2、重現(xiàn)性好,可作為柴胡藥材的質(zhì)量控制方法?！ ￡P(guān)鍵詞：柴胡；高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法；柴胡皂苷 DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDaC18chromatographycolumnandmethanolobilephase.Thefloobilephasel?min1.Thetubetemperatureofthedetectorethodi
3、seasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri. KeychinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurumscorzonerifolium,雜質(zhì)峰干擾十分嚴(yán)重,檢測靈敏度低,影響了含量測定的準(zhǔn)確性。本文應(yīng)用HPLCELSD法同時測定柴胡皂苷a，d的含量,其雜質(zhì)峰干擾小,分離度好,靈敏度高,出峰時間短,便于操作?！ ?儀器與試藥 高效液相色譜儀：Agilent1100系統(tǒng)，SEDEX75型蒸發(fā)光散射檢測器；超聲波清洗機(jī)（中國華南超聲波設(shè)備廠
4、），工作頻率25kHz，功率250chinenseDC.的根?！ ?方法與結(jié)果 2.1色譜條件色譜柱為AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流動相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml?min1，柱溫25℃；檢測器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。在選定的條件下，柴胡皂苷a、d對照品與樣品中其它組分色譜峰可基線分離，峰形好。按柴胡皂苷d峰計算，理論板數(shù)為3000以上。柴胡皂苷a，d對照品，供試品的高效液相色譜圖見圖1?！ ?.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供試品圖譜b對照品圖譜 圖1高效液相色譜圖（略） 2.2對照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡
5、皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。 2.3供試品溶液的制備取柴胡藥材粉末（過60目篩）約1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超聲處理40min，放置至室溫，加5%氨水甲醇至刻度，搖勻，靜置，精密吸取上清液20ml置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取柴胡皂苷a和d的混合對照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色譜儀中，分別測定柴胡皂苷a和d的峰面積。以峰面積自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.8972+1.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.8619+1.4965X，r=0.9992?！ ?.5精密度實驗精密吸取對照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.18%和1.53%，表明儀器的精密度良好?！ ?.6穩(wěn)定性實驗取樣品溶液,按含量測定方法及色譜條件分別置0，2，4，6,8h測定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.29%和1.68%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。 2.7重復(fù)性
7、實驗精密稱取同批號樣品6份，按含量測定方法及色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果樣品中柴胡皂苷a和d的平均含量分別為11.4541，8.3612mg?g1，RSD分別為1.34%和1.82%?！ ?.8回收率實驗采用加樣回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的樣品6份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入柴胡皂苷a對照品6.0544mg和柴胡皂苷d對照品4.4621mg，按含量測定方法及色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的平均回收率分別為
