液相色譜系統(tǒng)

《液相色譜系統(tǒng)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、液相色譜系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。液相色譜儀分離過程是儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來第二質(zhì)譜儀分析原理質(zhì)譜儀按應(yīng)用范圍分為同位素質(zhì)譜儀、無機(jī)質(zhì)譜儀和有機(jī)質(zhì)譜儀；按分辨能力分為高分辨、中

2、分辨和低分辨質(zhì)譜儀；按工作原理分為靜態(tài)儀器和動(dòng)態(tài)儀器。質(zhì)譜儀能用高能電子流等轟擊樣品分子，使該分子失去電子變?yōu)閹д姾傻姆肿与x子和碎片離子。這些不同離子具有不同的質(zhì)量，質(zhì)量不同的離子在磁場的作用下到達(dá)檢測器的時(shí)間不同，其結(jié)果為質(zhì)譜圖。質(zhì)譜儀以離子源、質(zhì)量分析器和離子檢測器為核心。離子源是使樣品分子在高真空條件下離子化的裝置。電離后的分子因接受了過多的能量會(huì)進(jìn)一步碎裂成較小質(zhì)量的多種碎片離子和中性粒子。它們在加速電場作用下獲取具有相同能量的平均動(dòng)能而進(jìn)入質(zhì)量分析器。質(zhì)量分析器是將同時(shí)進(jìn)入其中的不同質(zhì)量的離子，按質(zhì)荷比m/e大小

3、分離的裝置。分離后的離子依次進(jìn)入離子檢測器，采集放大離子信號，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理，繪制成質(zhì)譜圖。離子源、質(zhì)量分析器和離子檢測器都各有多種類型。近幾年來液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)得到廣泛使用的原因是液相色譜能夠高效分離和定量樣品，但是不能知道樣品中各種物質(zhì)是什么，再通過質(zhì)譜分析就可以鑒定樣品，進(jìn)而研究樣品的分子功能。第三我們看一下液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)與雙向電泳比較1誤差小雙向電泳分析樣品時(shí)，經(jīng)過一向等電聚焦，二向按分子量大小分離后，必須用軟件進(jìn)行分析，畫點(diǎn)，比對，但是經(jīng)過這兩個(gè)軟件分析過程中人為誤差比較大。而用液相色譜分析樣品時(shí)，樣品濃度以電信號方式

4、表示出來，人為誤差較小。2速度快雙向電泳分析樣品最快要兩天時(shí)間，用液相色譜分析樣品僅用十幾分鐘就可以了。3分辨率高4液相色譜柱可重復(fù)使用5自動(dòng)化操作，分析精確度高第四液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用1用于植物系統(tǒng)的分析非標(biāo)記液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)用于比較野生型擬南芥和擬南芥缺乏葡萄糖磷酸變位酶活性（PGM）突變體分析，并結(jié)合代謝物特征，肽的量化，生物信息學(xué)分析，相應(yīng)數(shù)據(jù)顯示一些蛋白和代謝物有助于區(qū)分野生型和PGM型。2植物離體細(xì)胞器的分析大多數(shù)研究利用雙向電泳技術(shù)植物細(xì)胞幾個(gè)亞細(xì)胞部分進(jìn)行了研究，包括葉綠體、線粒體、核、液泡、過氧化物酶、微粒體

5、膜、質(zhì)膜和細(xì)胞壁、質(zhì)外體。但是由于一些蛋白質(zhì)在細(xì)胞器中的表達(dá)量太低，用雙向電泳很難分離和鑒定，而液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以較好地分離和鑒定低豐度蛋白質(zhì)，進(jìn)而深入研究確定細(xì)胞器中蛋白質(zhì)的分子功能。3蛋白質(zhì)組分的分析嵌入式膜蛋白質(zhì)在營養(yǎng)、水的運(yùn)輸、感覺和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程是必不可少。植物膜蛋白質(zhì)的特性化是非常理想的，因?yàn)槟さ鞍椎牡拓S度和不同的生化特性，應(yīng)用以凝膠為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)分析方法是行不通的，所以經(jīng)常運(yùn)用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析膜蛋白質(zhì)。4翻譯后修飾的分析翻譯后修飾的闡明是蛋白質(zhì)組研究中最具挑戰(zhàn)性的課題，液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以大規(guī)模鑒定磷酸化點(diǎn)。因?yàn)?/p>

6、磷酸化蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)組的一小部分，需要在定量和鑒定之前有效的富集，一些預(yù)分離技術(shù)，如：固定金屬親和層析（IMAC）和免疫共沉淀技術(shù)得到廣泛的應(yīng)用。應(yīng)用液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在花椰菜中發(fā)現(xiàn)了新的水通道蛋白亞型，揭示了多種多樣的翻譯后修飾，如乙?；?，甲基化和磷酸化。