《細胞傳代》PPT課件

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1、細胞傳代組織培養(yǎng)(Tissueculture)是在體外模擬體內生理環(huán)境，在無菌、適當溫度和一定營養(yǎng)條件下，使從體內取出的組織生存、生長繁殖和傳代，并維持原有的結構和功能特性。廣義的組織培養(yǎng)與體外培養(yǎng)同義。體外培養(yǎng)(Invitro)包括所有結構層次的培養(yǎng)，即：組織培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。????所謂細胞培養(yǎng)(Cellculture)是指細胞包括單個細胞在體外條件的生長。體外培養(yǎng)細胞的生存條件：營養(yǎng)：體外培養(yǎng)細胞所需的營養(yǎng)物質與體內相同，主要有糖、氨基酸和維生素三大類。環(huán)境：①無菌，無菌是保證培養(yǎng)細胞生存的首要條件。②溫度，組織培養(yǎng)的最適溫度為35-

2、37℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝和生長將會受到影響，甚至導致死亡。③氣體，氣體也是細胞生存的必需條件之一。所需的氣體主要有O2和CO2。④pH值，多數(shù)細胞的適宜pH值為7.0-7.4，偏離此范圍對細胞可產生有害的影響。體外培養(yǎng)細胞分型離體培養(yǎng)細胞大多生長在甁皿等容器中，根據(jù)是否能貼附在支持物上生長，分為貼附型和懸浮型。粘附:是大多數(shù)有機體細胞在體內生存和生長發(fā)育的基本存在方式結果:基于粘附特性，使細胞與細胞之間相互結合形成組織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須粘附于一固相表面才能生存和生長培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相

3、表面才能生存和生長，因而屬于粘附型細胞粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細胞細胞在體內、外的粘附方式：存在差異體內：粘附是全方位,外形具有復雜的立體特征體外：多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面；外形一般與體內時明顯不同按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型1、成纖維細胞型：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質突起，生長時呈放射狀。除真正的成纖維細胞外，凡由中胚層間充質起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮等常呈本型狀態(tài)。另外，凡培養(yǎng)中細胞的形態(tài)與成纖維類似時皆可稱之為成纖維細胞。名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成

4、纖維細胞類似的來源：由中胚層間充質組織起源的組織如：真正的成纖維細胞，心肌，平滑肌，成骨細胞，血管內皮形態(tài)：似體內成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質向外伸出2—3個長短不等的突起，中有卵圓形核生長特點：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，細胞—細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起2、上皮型細胞：細胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時呈膜狀移動，處于膜邊緣的細胞總與膜相連，很少單獨行動。起源于內、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形

5、態(tài)。名稱：僅形態(tài)上似體內，實際上不完全相同來源：來源于外胚層、內胚層細胞,如：皮膚及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內的上皮細胞扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核生長特點：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動3、游走細胞型：呈散在生長，一般不連成片，胞質常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細胞相區(qū)別。4、多型細胞型：有一些細胞，如神經細胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。培養(yǎng)細胞形態(tài)不穩(wěn)定血清Hela高血清低血清成纖維細胞樣上皮樣細胞pHHel

6、a太酸或太堿標準pH成纖維細胞樣上皮樣細胞細胞密度3T3低密度高密度成纖維細胞樣上皮樣細胞生長狀態(tài)改變懸浮或貼附懸浮貼附圓形成纖維或上皮樣轉化與否未轉化轉化后成纖維樣可成上皮樣懸浮型：見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。體內細胞生長在動態(tài)平衡環(huán)境中，組織培養(yǎng)細胞的生存環(huán)境是甁皿等容器，生存空間和營養(yǎng)是有限的，當細胞增殖達到一定密度后，需要分離出一部分細胞和更新營養(yǎng)液，這一過程稱傳代（passage或subculture)。傳代的頻率與接種細胞數(shù)量、細胞生物特性以及營養(yǎng)液的性

7、質等有關。細胞“一代”僅指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間，它與細胞世代或倍增不同。在細胞的一代中，細胞能倍增3～6次。細胞傳一代后，一般要經過三個階段：1游離期：即細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的階段，也稱懸浮期2.指數(shù)增長期：是細胞增殖旺盛的階段，細胞分裂相多。3.停止期：細胞數(shù)量已達飽和密度，細胞停止增殖，也稱平頂期。培養(yǎng)細胞傳代根據(jù)不同細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞可直接吹打傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。操作步驟選擇生長良好的A549細胞一瓶，輕

8、輕搖動培養(yǎng)瓶數(shù)次，懸浮起附著在細胞表面的碎片，然后連同培養(yǎng)液倒出，用D-Hanks洗1次。加入消化液5滴，翻