《細(xì)胞傳代》PPT課件

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1、細(xì)胞傳代組織培養(yǎng)(Tissueculture)是在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下，使從體內(nèi)取出的組織生存、生長繁殖和傳代，并維持原有的結(jié)構(gòu)和功能特性。廣義的組織培養(yǎng)與體外培養(yǎng)同義。體外培養(yǎng)(Invitro)包括所有結(jié)構(gòu)層次的培養(yǎng)，即：組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。????所謂細(xì)胞培養(yǎng)(Cellculture)是指細(xì)胞包括單個(gè)細(xì)胞在體外條件的生長。體外培養(yǎng)細(xì)胞的生存條件：營養(yǎng)：體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)相同，主要有糖、氨基酸和維生素三大類。環(huán)境：①無菌，無菌是保證培養(yǎng)細(xì)胞生存的首要條件。②溫度，組織培養(yǎng)的最適溫度為35-

2、37℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝和生長將會(huì)受到影響，甚至導(dǎo)致死亡。③氣體，氣體也是細(xì)胞生存的必需條件之一。所需的氣體主要有O2和CO2。④pH值，多數(shù)細(xì)胞的適宜pH值為7.0-7.4，偏離此范圍對細(xì)胞可產(chǎn)生有害的影響。體外培養(yǎng)細(xì)胞分型離體培養(yǎng)細(xì)胞大多生長在甁皿等容器中，根據(jù)是否能貼附在支持物上生長，分為貼附型和懸浮型。粘附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存在方式結(jié)果:基于粘附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須粘附于一固相表面才能生存和生長培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相

3、表面才能生存和生長，因而屬于粘附型細(xì)胞粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細(xì)胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細(xì)胞細(xì)胞在體內(nèi)、外的粘附方式：存在差異體內(nèi)：粘附是全方位,外形具有復(fù)雜的立體特征體外：多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個(gè)附著平面；外形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型1、成纖維細(xì)胞型：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成

4、纖維細(xì)胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞，心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞，血管內(nèi)皮形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質(zhì)向外伸出2—3個(gè)長短不等的突起，中有卵圓形核生長特點(diǎn)：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而單獨(dú)行動(dòng)，游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個(gè)伸長的細(xì)胞突起2、上皮型細(xì)胞：細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長時(shí)呈膜狀移動(dòng)，處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形

5、態(tài)。名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全相同來源：來源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞,如：皮膚及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核生長特點(diǎn)：易相連成片，相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀生長時(shí)呈膜狀移動(dòng)，很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)3、游走細(xì)胞型：呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。4、多型細(xì)胞型：有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)不穩(wěn)定血清Hela高血清低血清成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞pHHel

6、a太酸或太堿標(biāo)準(zhǔn)pH成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞細(xì)胞密度3T3低密度高密度成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞生長狀態(tài)改變懸浮或貼附懸浮貼附圓形成纖維或上皮樣轉(zhuǎn)化與否未轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化后成纖維樣可成上皮樣懸浮型：見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細(xì)胞容易大量繁殖。體內(nèi)細(xì)胞生長在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中，組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是甁皿等容器，生存空間和營養(yǎng)是有限的，當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，需要分離出一部分細(xì)胞和更新營養(yǎng)液，這一過程稱傳代（passage或subculture)。傳代的頻率與接種細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞生物特性以及營養(yǎng)液的性

7、質(zhì)等有關(guān)。細(xì)胞“一代”僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間，它與細(xì)胞世代或倍增不同。在細(xì)胞的一代中，細(xì)胞能倍增3～6次。細(xì)胞傳一代后，一般要經(jīng)過三個(gè)階段：1游離期：即細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的階段，也稱懸浮期2.指數(shù)增長期：是細(xì)胞增殖旺盛的階段，細(xì)胞分裂相多。3.停止期：細(xì)胞數(shù)量已達(dá)飽和密度，細(xì)胞停止增殖，也稱平頂期。培養(yǎng)細(xì)胞傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細(xì)胞可直接吹打傳代；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。操作步驟選擇生長良好的A549細(xì)胞一瓶，輕

8、輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶數(shù)次，懸浮起附著在細(xì)胞表面的碎片，然后連同培養(yǎng)液倒出，用D-Hanks洗1次。加入消化液5滴，翻