植物組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)

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1、第六章植物組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)全世界已發(fā)現(xiàn)植物病毒近700種。大多數(shù)農(nóng)作物，尤其是無性繁殖的家作物都受到一種或一種以上病毒侵染，且?guī)Ф局曷矢?。病毒對寄主植物可造成滅性危害，導致大幅度減產(chǎn)，甚至全株死亡。潛隱性病毒侵染植物造成癥狀不明顯的慢性危害，不易被發(fā)現(xiàn)，尤其危險。受病毒侵染的植物全身終生帶毒，目前尚無藥物可治愈。國內(nèi)外解決這一問題的有效途徑是培育無病毒苗，實施農(nóng)作物無病毒化栽培。第一節(jié)常見植物病毒及其癥狀一種病毒可侵染許多植物，而同種植物又可被許多病毒侵染。植物病毒對農(nóng)作物的危害可使農(nóng)業(yè)生產(chǎn)受到巨大的損失。在一年生種子繁殖作物上，可以采取一些預(yù)防措施，減輕當年病害的發(fā)生程度，一般不影響下一

2、季的發(fā)病。木本植物一旦發(fā)病，以后連年都發(fā)病。營養(yǎng)繁殖的作物如馬鈴薯，番木瓜，草莓等，連年種植可以積累多種病毒侵染。馬鈴薯的退化，就是由多種病毒引起的。一、植物病毒的發(fā)現(xiàn)很多植物體內(nèi)都帶有植物病毒，由于人類視覺所限，形體越小的生物就越不易被發(fā)現(xiàn)，所以病毒的發(fā)現(xiàn)比其它生物要晚得多。直到19世紀末期，德國的A．Mayer發(fā)現(xiàn)煙草上出現(xiàn)深淺相間的綠色條紋，稱之為煙草花葉病，并證實其具有傳染性；后經(jīng)俄國植物病理學家D．Ivanowski對煙草花葉病病原進行研究，認為它是由一種極小的“細菌”引起的；最終由荷蘭人M．W．Beijerinck首先提出煙草花葉病病原是一種“傳染性的活性液體”或稱“病毒”。此

3、后，許多學者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了各種植物病毒。1935年美國人Stanley和Bawden揭示了煙草花葉病毒的化學本質(zhì)不是純蛋白而是核蛋白；1940年德國的Kausche等首次在電鏡下視察到煙草花葉病毒的桿狀外形。由此，病毒研究進入了更深入的領(lǐng)域。目前，人們不但能在實踐生產(chǎn)中有效地防治病毒的侵染，而且能利用病毒作為遺傳工程的載體改造植物。二、植物病毒的類型植物病毒大部分屬于單鏈RNA病毒，少數(shù)為DNA病毒。其基本形態(tài)有桿狀、絲狀和等軸對稱的近球形二十面體。植物病毒雖是嚴格的細胞內(nèi)寄生物，但專一性并不強，往往一種病毒可寄生在不同種、屬甚至不同科的植物上。如煙草花葉病毒能侵染十多個科，200多種草本和木

4、本植物。已知的植物病毒種類有600多種，絕大多數(shù)種子植物易發(fā)生病毒病。植物被病毒感染后，一般表現(xiàn)出三類癥狀：①因寄主細胞的葉綠素或葉綠體被破壞，使植物出現(xiàn)花葉或黃化病癥。②阻礙植株發(fā)育，使植株發(fā)生矮化、叢枝或畸形等。③殺死植物細胞使植株出現(xiàn)枯斑或壞死。三、植物病毒對植物的侵染途徑由于植物病毒一般無專門吸附結(jié)構(gòu)，而且植物細胞表面至今也未發(fā)現(xiàn)有病毒特異性受體部位，因而植物病毒的侵染途徑主要是通過傷口。如：①借昆蟲刺吸式口器損傷植物而侵入細胞。②借帶病汁液與植物傷口相接觸而侵入。③借人工嫁接時的傷口而侵入。植物病毒侵入植物細胞后，病毒按其各自的核酸類型進行復制。其增殖過程因病毒類型不同其細節(jié)也很

5、不相同，但步驟大致相似。四、植物病毒病的防治目前防治植物病毒病的基本策略是：防重于治和綜合防治。一般采取以下措施：1、選育抗病品種選育病毒不能侵入或即使侵入也無法復制的抗病品種和對病毒感染有較強適應(yīng)性的耐病品種。2、消滅傳毒昆蟲利用化學農(nóng)藥、生物農(nóng)藥或物理誘捕等方法治蟲。3、用無性繁殖法培育無毒苗利用植物莖尖生長點并結(jié)合熱處理（35～40℃）和組織培養(yǎng)的方法得到無毒苗。此法在防治馬鈴薯、葡萄、柑桔及某些觀賞植物的病毒病方面十分有效。4、接種弱毒株來保護植物這是一種“給莊稼種牛痘”的方法。目前在許多國家已可用此法來預(yù)防蕃茄花葉病，用于其他植物病毒的弱毒株也在實驗之中。5、采用合理的栽培措施等

6、五、植物病毒的癥狀植物病毒引起植株的癥狀是各異的，在觀賞植物上由病毒引起外部癥狀主要有以下幾種：（1）變色：褪綠、黃化、花葉、斑駁、紅葉等，常見病毒有；香石竹斑駁病毒、黃瓜花葉病毒、芋花葉病毒等。（2）壞死：常見的壞死是病斑或斑點。有輪斑、環(huán)斑、條斑‘條紋等。如香石竹壞死斑點病毒、，鳳仙花壞死斑點病毒草等。（3）畸形：植株可出現(xiàn)矮縮、矮化或葉片皺縮、卷葉、蕨葉等病狀。（4）萎蔫：主要是指植物根或莖的維管束組織受到破壞而發(fā)生供水不足所出現(xiàn)的凋萎現(xiàn)象。第二節(jié)脫毒材料的獲取目前在生產(chǎn)上常用的脫毒材料獲取方法主要有：熱處理脫毒、莖尖脫毒、抗病毒藥劑脫毒等。此外，也有人通過愈傷組織、花絲組培等方法獲

7、取無毒植株。一、熱處理脫毒帶毒植株經(jīng)高溫處理后，病毒濃度會降低。通常處理方法是：把適當?shù)牟牧弦迫胍粋€熱處理室或光照培養(yǎng)箱中，在35~40℃高溫下，根據(jù)種類特征和材料情況處理數(shù)天到數(shù)周不等。如香石竹在38℃連續(xù)處理2個月，消除了莖尖內(nèi)所有病毒。百合、郁金香、，風信子等球根花卉，用休眠種球進行熱處理，可大大降低種球生長點內(nèi)的病毒含量。熱處理有一定的局限性，一方面熱處理只能降低植株內(nèi)病毒的含量，單獨處理難以獲得無毒材料；另一方