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1、楊柏云南昌大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院第七章 植物無(wú)病毒苗的培育一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1889年,印尼的爪哇人發(fā)現(xiàn),患枯萎病的甘蔗放在50-520C的熱水中保持30min,可去除枯萎病。1936年,Kunkel報(bào)道患有桃黃萎病(yellowvirus)的植株,在34-360C處理14天可失活。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1943年,white在體外培養(yǎng)感染了煙草花葉病毒(TMV)的馬鈴薯,并用枯斑寄主法測(cè)定了其根不同部位的病毒含量,發(fā)現(xiàn)根尖部位的病毒含量比其他部位少,甚至不存在病毒。隨著往成熟區(qū)的推移,病毒含量越來(lái)越高。這一發(fā)現(xiàn)為莖尖培養(yǎng)脫除病毒提供了理論依據(jù)。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1952年,Mor
2、el首先從感染了花葉病毒和斑萎病毒的大麗花植株上切取莖尖,通過(guò)組織培養(yǎng)首次獲得了無(wú)病毒的大麗花;1954年,Kassanis用熱處理防治馬鈴薯卷葉病以后,這一技術(shù)即被用于防治許多植物的病毒病。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1960年,Morel培養(yǎng)蘭屬植物的莖尖,實(shí)現(xiàn)了去病毒和快速繁殖二個(gè)目的,導(dǎo)致了全世界蘭花工業(yè)的興起?,F(xiàn)在莖尖培養(yǎng)脫毒法已經(jīng)成為植物無(wú)毒苗生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種方法。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1972年,Bake研究表明,植物組織在熱水中長(zhǎng)時(shí)間浸泡常常會(huì)窒息死亡,并且這種處理也會(huì)打破或延長(zhǎng)植物的休眠期。所以現(xiàn)在更常用的方法是將病毒感染的植物用35℃~38℃熱空氣處理2~4周或
3、者更長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行脫毒。此法尤其適合處理生理干旱的材料和處于休眠狀態(tài)的果樹。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1984年,Shimomura認(rèn)為抗病毒劑主要作用是抑制病毒增殖或移動(dòng),但抗病毒劑抑制病毒增殖的機(jī)理尚不完全清楚,可能是抑制病毒RNA磷酸鹽的合成或者使某些病毒暫時(shí)處于無(wú)活性狀態(tài)。一、植物脫毒研究簡(jiǎn)史1994年,Kim-JY采用不同濃度的病毒唑加入到培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)基中,分別獲得了兩個(gè)百合品種的無(wú)毒苗。關(guān)于化學(xué)療法在百合脫毒上的應(yīng)用效果,并在鱗片培養(yǎng)(Osakeetal,1996)和愈傷組織培養(yǎng)(Xuetal,2000)實(shí)驗(yàn)中得到肯定。二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義1、病毒對(duì)植物外觀狀態(tài)的影響花
4、葉型:也稱花葉病。是由于葉綠體結(jié)團(tuán)或退化引起。造成葉片上形成暗綠(正常)、亮綠(結(jié)團(tuán))和黃色(退化)區(qū)域。環(huán)斑型:在葉片、果實(shí)或莖的表面形成單線圓紋或同心紋的環(huán)、全環(huán)或半環(huán),以用連續(xù)屈曲狀的環(huán),常常和花葉同時(shí)發(fā)生。二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義畸形生長(zhǎng)型:各種反常的生長(zhǎng)。變色型:葉片的局部或全部顏色改變。如褪綠、變黃、變橙、變紅、變紫、變藍(lán)綠等。郁金香碎裂病毒感染郁金香,使其花色由單色發(fā)生斑駁或縱向條點(diǎn)。壞死與變質(zhì):某些細(xì)胞組織死亡或組織質(zhì)地變軟或變硬或木栓化。黃瓜花葉病毒(CMV)百合叢簇?。–TLV)郁金香條斑病毒(TuBV)甘薯羽狀斑駁病毒 甘薯明脈病毒二、培養(yǎng)無(wú)病毒
5、種苗的意義二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義番茄黃瓜花葉病毒病癥 水稻矮縮病癥二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義2、病毒對(duì)作物產(chǎn)量和品質(zhì)的影響病毒的危害給作物生產(chǎn)帶來(lái)重大的損失。如草莓病毒的危害,使草莓產(chǎn)量嚴(yán)重降低,品質(zhì)大大退化。葡萄扇葉病毒使葡萄減產(chǎn)10~18%,為害馬鈴薯有幾十種病毒,給馬鈴薯生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重危害,造成減產(chǎn)30%以上?;ɑ苌喜《镜奈:Υ蟠笥绊懫溆^賞價(jià)值,表現(xiàn)花少而小,產(chǎn)生畸形、變色等。二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義二、培育無(wú)病毒種苗的意義靠無(wú)性繁殖的作物,如利用莖(塊莖、球莖、鱗莖、根莖、匍匐莖),根(塊根、宿根)、枝、葉、芽(頂芽、側(cè)芽、球芽、不定芽)等通過(guò)嫁接、分株、扦插、壓
6、條等途徑來(lái)進(jìn)行繁殖的,隨著生產(chǎn)栽培時(shí)間的延長(zhǎng),危害越來(lái)越甚,種類越來(lái)越多,危害也就越來(lái)越嚴(yán)重。已報(bào)道的植物病毒達(dá)500多種,其中,核果類:1930年5種,1951年48種,1976年95種;馬鈴薯:30余種;蘋果:30余種;柑桔:20多種。觀賞植物病毒:200多種。二、培育無(wú)病毒種苗的意義現(xiàn)在離體培育無(wú)病毒苗(virus-freeplant)已在生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用。大蒜經(jīng)組培脫毒后,蒜頭可增產(chǎn)23.3%~114.3%,蒜薹增產(chǎn)58.3%~175.0%;用脫毒草莓苗進(jìn)行生產(chǎn),可提高果實(shí)產(chǎn)量20.7%~45.5%,果實(shí)可溶性固形物含量增加5.3%~15.3%;用馬鈴薯脫毒苗可提高產(chǎn)
7、量30%以上,甚至成倍增長(zhǎng);甘薯增產(chǎn)在20%以上。二、培養(yǎng)無(wú)病毒種苗的意義二、培育無(wú)病毒種苗的意義為了提高作物的產(chǎn)量和質(zhì)量,去除病毒和其它病原菌是非常必要的。雖然通過(guò)防治細(xì)菌和真菌的藥物處理,可以治愈受細(xì)菌和真菌侵染的植物,但現(xiàn)在還沒(méi)有什么藥物可治愈受病毒侵染的植物。用組織培養(yǎng)法去除病毒是唯一行之有效的方法。一旦獲得了一個(gè)不帶病原菌的植株,就可在不致受到重新侵染的條件下,對(duì)它進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)繁殖。三、植物快速繁殖的途徑和方法1.無(wú)菌短枝型(微型扦插)(節(jié)培法):外植體為單芽的莖段,轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基,一