島津液相維修培訓(xùn).ppt

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1、歡迎參加島津液相維修培訓(xùn)班采用“HPLC”級溶劑避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對試樣有適宜的溶解度溶劑粘度要小與檢測器相匹配流動相的選擇其他問題其他問題水的等級純化水蒸餾水去離子水波長(nm)純化水去離子水因為不純物的存在，去離子的吸光率較高純化水中去除了無機和有機的污染物吸光率其他問題水/MeOH梯度ODS柱鬼峰GradientCurve1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.鬼峰的出現(xiàn)其他問題溶劑的等級HPLC級優(yōu)級純分析純都經(jīng)過蒸餾和0.

2、45u的過濾(除纖維毛,未溶解的機械顆粒優(yōu)級純的純度比分析純大,但里面含有防腐劑和抗氧化劑HPLC級經(jīng)過0.2u的過濾,且除去有紫外吸收的雜質(zhì)微量分析、梯度洗脫其他問題甲醇乙睛正己烷分析純級和HPLC級溶劑的吸光度比較圖其他問題溶劑的過濾濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶劑。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可以用于強酸，不適用于二甲基甲酰胺。再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機溶劑脫氣：除去流動相中溶解或因混合

3、而產(chǎn)生的氣泡氣泡對測定的影響：1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動其他問題脫氣的目的1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度1）示差折射率檢測器*使折射率變化2）UV檢測器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收3）熒光檢測器*溶解氧氣有消光作用其他問題其他問題脫氣的方法1.超聲波脫氣法2.He清除法3.使用氟樹脂膜的減壓脫氣法其他問題He清除法調(diào)壓閥排氣閥往送液泵流動相過濾器其他問題氟樹脂膜

4、真空室往送液泵真空泵控制器流動相使用氟樹脂膜的減壓脫氣法梯度洗脫法梯度洗脫裝置：高壓梯度：用兩臺高壓輸液泵將兩種溶劑輸入低壓梯度：在常壓下將兩種溶劑（或多元溶劑）混合，然后用高壓輸液泵將流動相輸入到色譜柱中。梯度洗脫：優(yōu)點：可提高分離度、縮短分離時間、降低最小檢測量和提高分離精度梯度洗脫法的注意點溶劑的純度要高，否則梯度洗脫的重現(xiàn)性差梯度混合的溶劑互溶性要好梯度洗脫應(yīng)使用對流動相組成變化不敏感的選擇性檢測器（如紫外吸收檢測器或熒光檢測器），而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器（如示差折光檢測器）查

5、看空白實驗的數(shù)據(jù)。遵守分析周期。（最初的分析數(shù)據(jù)不采用）樣品處理1.使用流動相溶解樣品--減少溶劑峰，尤其是組分峰靠近溶劑峰時由為重要--保證樣品在流動相中的溶解度，避免樣品在系統(tǒng)中尤其在柱中產(chǎn)生沉淀其他問題緩沖液選擇緩沖液的步驟1.確定最佳分離狀態(tài)時的流動相pH2.選擇具有與流動相的pH相近的pKa的緩沖液（即使?jié)舛认∫簿哂休^強能力的緩沖液）3.確認(rèn)檢測波長下緩沖液是否有大的吸收（在波長210nm附近進(jìn)行檢測時，不能用醋酸和檸檬酸的緩沖液）一些代表性弱酸的pKapK1pK2pK3醋酸4.87檸檬酸3.1

6、34.766.40磷酸2.167.2112.32其他問題緩沖液的使用使用前必須過濾使用后一定要進(jìn)行清洗，以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min（1ml/min），再用甲醇沖洗30min易受到細(xì)菌和霉菌的影響不能直接用有機溶劑沖洗液相色譜容易出問題的部件維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器手動進(jìn)樣器檢測器管線選擇材料不銹鋼TeflonPEEK(聚醚酮)尺寸0.1mmI.D.x1.6mmO.D.0.3mmI.D.x1.6mmO.D.0.5mmI.D.x1.6mmO.D.0.8mmI.D.x

7、1.6mmO.D.管線材料不銹鋼(可用于所有連接)能承受幾千kg/cm2壓力酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕(尤其在pH小于2時)PEEK(可用于所有連接)能承受高達(dá)250kg/cm2壓力可在整個PH范圍(pH1-14)內(nèi)使用不適用于高溶解性溶劑如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反應(yīng)管和排液管)化學(xué)惰性大能承受5kgf/cm2壓力材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不必將塑料管剪斷吸濾頭液相色譜容易出問

8、題的部件LC-10ATvp泵：串聯(lián)式往復(fù)泵LC-10ADvp泵：并聯(lián)式往復(fù)泵液相色譜容易出問題的部件液相色譜容易出問題的部件單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動相單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭液相色譜容易出問題的部件故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通措施：1）用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生負(fù)壓，使寶石球與墊片分開2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超