血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn).ppt

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1、血凝(HA)與血凝抑制(HI)試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)材料五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定六、注意事項(xiàng)七、新城疫背景介紹一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的基本原理、操作方法和結(jié)果判定方法2、了解新城疫有關(guān)背景知識二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、血凝試驗(yàn)(HA)檢測新城疫抗原2、血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測新城疫抗體三、實(shí)驗(yàn)原理1、血凝試驗(yàn)（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種動物地紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝（HA）,也稱直接血凝反應(yīng)。病毒顆粒紅細(xì)胞2、血凝抑制試驗(yàn)

2、（HI）原理：當(dāng)病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆粒或其血凝素時，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆?；蜓刂苯咏佑|。這時紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱血凝抑制反應(yīng)。Iamlate！抗體抗原四、實(shí)驗(yàn)材料1、血凝板（2人/塊）2、新城疫陽性血清3、被檢血清（1份）4、1％紅細(xì)胞懸液5、稀釋液6、移液器（50ul,2人/把）7、槍頭五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定血凝試驗(yàn)（HA)1、在血凝板上第一排的1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水2、在第1孔內(nèi)加入50

3、ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul3、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul4、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘5、結(jié)果判定1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×紅細(xì)胞對照生理鹽水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050棄50紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－血凝

4、效價測定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個環(huán)狀，四周有凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無凝集；血凝價的判定以出現(xiàn)＋＋（50％凝集）的抗原最高稀釋倍數(shù)為該抗原的血凝價（1:128）。50ul1:256稀釋的病毒抗原為該抗原的一個血凝單位。稀釋倍數(shù)2×4×8×

5、16×32×64×128×256×512×1024×2048×細(xì)胞對照結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋————血凝抑制試驗(yàn)1、將病毒抗原稀釋成4個血凝單位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水；3、在第1孔內(nèi)加入被檢血清50ul，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul；4、第1－12孔內(nèi)加入4單位抗原50ul（第12孔為病毒對照）；5、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul；6、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘6、結(jié)果判定12

6、34567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×病毒對照生理鹽水505050505050505050505050血清5050505050505050505050棄504單位抗原505050505050505050505050紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－血凝抑制效價測定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)

7、胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個環(huán)狀，四周有下凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無凝集。血凝抑制價的判定以出現(xiàn)完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制價（1:4）。稀釋倍數(shù)2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×血清對照結(jié)果——＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋—

8、六、注意事項(xiàng)1、紅細(xì)胞用前請搖勻2、用槍加樣定要準(zhǔn)，盡量不要有氣泡3、結(jié)果判定有耐心4、HA和HI勿相混七、新城疫背景介紹雞新城疫（NewcastleDiseaseND）1、概述ND是由ND病毒（NewcastlediseaseVirus,NDV）引起的高度接觸性和高度毀滅性的急性敗血性傳染病。1926年首先發(fā)生于印尼，同年發(fā)現(xiàn)于英國新城我國1928年有該病記載是當(dāng)今全球范圍內(nèi)最嚴(yán)重的家禽傳染病之一被國際獸疫局（OIE)列為A類傳染病別名：新城疫、亞洲雞溫、偽雞瘟雞瘟：禽流感、歐洲雞溫、真性雞