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《甘露聚糖酶多克隆抗體的制備及其ELISA雙抗夾心法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、畜牧與飼料科學(xué)Anima1日6nndandFeedScience2014，35(1)：12-13甘露聚糖酶多克隆抗體的制備及其ELISA雙抗夾心法的建立范文斌，王和平，劉永斌(1．呼和浩特職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010051；2．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特01018；3．內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院．內(nèi)蒙古呼和浩特010031)摘要：該研究旨在建立一種檢測轉(zhuǎn)B一甘露聚糖酶基因大腸桿菌表達(dá)產(chǎn)物的有效方法。由于表達(dá)量有限及產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的變化，常規(guī)的檢測方法不能準(zhǔn)確地判斷表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)，因此，該研究運用自制的抗原和抗血清建立酶聯(lián)免疫法來進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)p一甘露聚糖酶
2、基因大腸桿菌成功地表達(dá)了p一甘露聚糖酶。關(guān)鍵詞：抗血清；13-甘露聚糖酶：酶聯(lián)免疫法中圖分類號：$852．43文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章順序編號：1672—5190(2014)01—012—02PreparationofPolyclonalAntibodiesofMannanaseandtheEstablishmentOfELISADouble．．a(chǎn)ntibodySandwichMethodFANWen—bin．WANGHe—ping~．LIUYong—bin(1．HohhotVocationalCollege，Hohhot01051，China；2．InnerMon
3、goliaAgriculturalUniversity，Hohhot01018，China；3．InnerMongoliaAcademyofAgricultural＆AnimalHusbandrySciences．Hohhot01031，China)Abstract：ThepurposeofthisstudywastoestablishaneffectivemethodfordetectingtheexpressedproductbyEscherichiacolitransformedby3-mannanase．Duetolittleexpressionamo
4、untandthechangesofproductstructure，theconventionaldetectionmethodcouldntaccuratelyjudgethepropertiesofexpressionproduct．Sotheselfmadeantigenandanti-serumwereusedtoestablishELISA．ThedetectionresultsshowedthatEcolitransformedby3-mannanasecouldsuccessfullyexpress3-mannanase．Keywords：an
5、tiserum；B—mannanase；ELISAB一甘露聚糖酶在食品工業(yè)中以及在飼料工業(yè)中小白鼠10只，作為免疫動物，將實驗室自制的高純度作為飼料添加劑都有著廣泛的應(yīng)用。而在飼料中添加的RutC一30里氏木霉一甘露聚糖酶作為抗原來免纖維素酶對纖維素的降解效果有限，飼料的利用效率疫。免疫2種動物的方法都采取皮下分多個部位注不能大幅度的提高，而當(dāng)這種酶長期存在于動物體射，共免疫3次，時間間隔為2周，初次免疫加等量的內(nèi)，這樣就會大大提高動物對纖維素的利用率。通過完全佐劑。加強免疫加等量不完全佐劑。每只兔的免將轉(zhuǎn)B一甘露聚糖酶基因大腸桿菌植入豬的大腸內(nèi)，疫劑量是1m
6、g，每只小鼠的免疫劑量為100Ixg。家兔讓這種菌長期定植并且分泌B一甘露聚糖酶，這樣就采取頸動脈放血，小鼠用摘除眼球的方法取血，分離實現(xiàn)了提高纖維素降解率的愿望。該研究的目的是建血清，在一20cc凍存?zhèn)溆胅。立一種B一甘露聚糖酶的準(zhǔn)確的檢測方法_1]，以檢測腸1．2．2直接ELISA法確定2種酶標(biāo)二抗的最適合稀道中的菌是否分泌了B一甘露聚糖酶。釋倍數(shù)：分別將1：200稀釋的兔抗血清和鼠抗血清包被l材料和方法酶標(biāo)板．用1％BSA封閉，將2種酶標(biāo)二抗用1％的BSA1．1材料從1：1000稀釋到l：1100??直至稀釋到1：1600，加1．1．1主要儀器試劑：酶標(biāo)
7、儀(TECAN)，96孔酶標(biāo)板入包被好的酶標(biāo)板，再加入底物，150L／孑L反應(yīng)15min，(Nunc)，羊抗兔HRP—IgG(華美生物工程有限公司)，然后用2mol／L的H2SO50孔終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀羊抗鼠HRP—IgG(華美生物工程有限公司)，完全弗氏在492nm測OD值。比較所測得的OD值，將開始變佐劑，不完全弗氏佐劑。小時的稀釋倍數(shù)確定為最適稀釋倍數(shù)H]。1．1．2實驗動物：雌性KM小白鼠(內(nèi)蒙古大學(xué)動物1．2．3ELISA法確定抗原的最適濃度：將純化的B一甘中心)，健康雄性兔(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué))。露聚糖酶用包被緩沖液稀釋成1、3、5直到15Ixg／mL
8、1．2方法系列濃度，然后包被酶標(biāo)板，封
